內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，具有強(qiáng)烈的促進(jìn)血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系。內(nèi)皮素（ET）主要通過(guò)與靶細(xì)胞膜上的ET受體（ET_A）結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)?？蒲腥藛T通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ET_A基因在大腸桿菌細(xì)胞中的高效表達(dá)，其過(guò)程如圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶Apa I的識(shí)別序列為，限制酶Xho I的識(shí)別序列為。
請(qǐng)據(jù)圖分析回答：

（1）進(jìn)行過(guò)程①時(shí)，需要加入緩沖液、引物、脫氧核苷酸和

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

酶等。完成過(guò)程①②③的目的是

獲取目的基因（ETA）基因

獲取目的基因（ETA）基因

。
（2）過(guò)程③和⑤中，限制酶Xho I切割DNA，使

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵斷開(kāi)，形成的黏性末端是

。用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是

使目的基因定向連接到運(yùn)載體上（或防止目的基因環(huán)化）

使目的基因定向連接到運(yùn)載體上（或防止目的基因環(huán)化）

。
（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體，目的基因上游的啟動(dòng)子是

RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合

RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合

的部位，進(jìn)而可驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。除圖中已標(biāo)出的結(jié)構(gòu)外，基因表達(dá)載體還應(yīng)具有的結(jié)構(gòu)是

復(fù)制原點(diǎn)、終止子

復(fù)制原點(diǎn)、終止子

。
（4）過(guò)程⑥要用CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的

感受態(tài)

感受態(tài)

細(xì)胞。
（5）將SNAP基因與ETA基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，其目的是有利于檢測(cè)

ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量

ETA基因能否表達(dá)及表達(dá)量

。
（6）大腸桿菌等原核生物不僅可以作為基因工程的受體細(xì)胞，它們往往還含有一些有重要價(jià)值的外源基因，而這些外源基因無(wú)需改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá)，原因是

葉綠體DNA與原核生物DNA結(jié)構(gòu)類似

葉綠體DNA與原核生物DNA結(jié)構(gòu)類似

?；蚬こ滩僮鲿r(shí)可將外源基因整合到葉綠體基因組中，不僅能有效改良植物的品質(zhì)，還由于葉綠體轉(zhuǎn)基因不會(huì)隨

花粉

花粉

（“花粉”或“卵細(xì)胞”）傳給后代，從而能在一定程度上避免轉(zhuǎn)基因作物中的外源基因擴(kuò)散到其他同類作物。