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X基因存在于水稻基因組中,僅在體細胞(2n)和精子中正常表達,但在卵細胞中不轉錄。為研究X基因表達對卵細胞的影響,設計了如圖1所示實驗。回答下列問題:
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(1)科研工作者從水稻體細胞或精子中提取RNA,構建
cDNA(或部分基因)
cDNA(或部分基因)
文庫,進而獲得X基因編碼蛋白的序列。
(2)為使X基因能在卵細胞中成功表達,需在基因表達載體中插入
可在水稻卵細胞中啟動X基因轉錄的啟動子(和終止子)
可在水稻卵細胞中啟動X基因轉錄的啟動子(和終止子)
。將重組質粒導入水稻愈傷組織細胞,最常用的方法是
農桿菌轉化法
農桿菌轉化法
。
(3)為篩選出含有重組質粒的菌落,需采用含有不同抗生素的平板進行篩選。符合要求的菌落在只含潮霉素、只含卡那霉素、含潮霉素和卡那霉素三種培養(yǎng)基中的生長情況分別為
不生長、生長、不生長
不生長、生長、不生長
(填“生長”或“不生長”)。
(4)為鑒定篩選出的菌落中是否含有正確插入目的基因的重組質粒,擬設計引物進行PCR鑒定。PCR反應體系中除含緩沖液、模板DNA、dNTP(包含dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、引物以外,還應含有
Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶)
Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶)
;圖2所示為甲、乙、丙3條引物在正確重組質粒片段中的相應位置,PCR鑒定時應選擇的一對引物是
甲、乙
甲、乙
。某學生從某一菌落的質粒中擴增出了400bp片段,則該菌落中含有的質粒
不是
不是
(填“是”或“不是”)正確插入目的基因的重組質粒。
(5)從轉基因植株未成熟種子中分離出胚,觀察到細胞內僅含一個染色體組,判定該胚是由未受精的卵細胞發(fā)育形成的,而非轉基因水稻卵細胞在未受精時不能發(fā)育,由此表明
X基因在卵細胞成功表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚
X基因在卵細胞成功表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚
。

【答案】cDNA(或部分基因);可在水稻卵細胞中啟動X基因轉錄的啟動子(和終止子);農桿菌轉化法;不生長、生長、不生長;Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶);甲、乙;不是;X基因在卵細胞成功表達能使卵細胞不經受精直接發(fā)育成胚
【解答】
【點評】
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