醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，番茄紅素具有一定的抗癌效果，其合成、轉(zhuǎn)化途徑如圖一所示．由于普通番茄合成的番茄紅素易發(fā)生轉(zhuǎn)化，科學(xué)家設(shè)計(jì)了一種重組DNA（質(zhì)粒三）能表達(dá)出雙鏈RNA（發(fā)卡），番茄細(xì)胞可以識(shí)別侵入的雙鏈RNA并將該雙鏈RNA及具有相同序列的單鏈RNA一起降解，提高了果實(shí)中番茄紅素的含量（圖二）．請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：

（1）表達(dá)出“發(fā)卡”的DNA片段實(shí)際上是兩個(gè)反向連接的

番茄紅素環(huán)化酶

番茄紅素環(huán)化酶

基因，由于“發(fā)卡”阻止了其在細(xì)胞內(nèi)的

翻譯

翻譯

（填“轉(zhuǎn)錄”或“翻譯”）過(guò)程，所以提高了果實(shí)中番茄紅素的含量．
（2）為保證第二個(gè)目的基因片段反向連接，處理已開(kāi)環(huán)質(zhì)粒所用的兩種限制酶是

Ecl

Ecl

和

BamHⅠ

BamHⅠ

．
（3）科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，培育成功的轉(zhuǎn)基因番茄植株對(duì)光能的利用能力有所下降，據(jù)圖一推測(cè)可能的原因是

胡蘿卜素、葉黃素合成受阻，光反應(yīng)被抑制

胡蘿卜素、葉黃素合成受阻，光反應(yīng)被抑制

為解決此問(wèn)題，可以按照乳腺生物反應(yīng)器的原理，在此表達(dá)出“發(fā)卡”的DNA片段前面加入只在果實(shí)中發(fā)揮作用的

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

．
（4）去磷酸化是去掉黏性末端最外側(cè)游離的磷酸基團(tuán)．對(duì)已開(kāi)環(huán)的質(zhì)粒二兩端去磷酸化的主要作用是阻止其

自身成環(huán)（自身環(huán)化）

自身成環(huán)（自身環(huán)化）

，該DNA分子仍可以和目的基因連接，形成缺少

2

2

個(gè)磷酸二酯鍵的重組質(zhì)粒，隨后在細(xì)胞中被修復(fù)．