銅綠假單胞菌常常引起禽類、水貂等發(fā)生敗血癥及呼吸系統(tǒng)感染等疾病，給養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重損失?？蒲腥藛T嘗試克隆和表達該菌外膜蛋白oprD基因，以用于后期的疫苗研制工作。相關(guān)限制酶識別序列及用于構(gòu)建基因表達載體的質(zhì)粒圖示如下，其中Amp“表示氨芐青霉素抗性基因，請回答下列問題：
| 限制酶 | 識別序列 |
| BamHI | 5'G↓GATCC3' |
| EcoRI | 5'G↓A ATTC3' |
| Not I | 5'GC↓GGCCGC3 |
| XhoI | 5'C↓TCGAG3' |
脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
，一個質(zhì)粒分子中通常含 0
0
個游離的磷酸基團。Amp基因常作為基因工程中的標記基因，標記基因的作用是 供重組DNA的鑒定與選擇
供重組DNA的鑒定與選擇
。（2）若已知銅綠假單胞菌的oprD基因序列，可利用
PCR
PCR
技術(shù)快速大量擴增該基因。為便于擴增的oprD基因與表達載體的連接，在設(shè)計引物時，常在兩條引物的 5′
5′
端加上限制酶的識別序列，設(shè)計后的引物如下：引物1：5'-CGGGATCCATGAAAGTGATGAAGTGG-3'；
引物2：5'-CCCTCGAGTTACAGGATCGACAGCGG-3'。
（3）根據(jù)上題中的引物信息分析，在構(gòu)建oprD基因表達載體時，可選擇
BamHⅠ
BamHⅠ
和 XhoⅠ
XhoⅠ
兩種不同的限制酶同時切割目的基因和質(zhì)粒，以提高目的基因和質(zhì)粒的重組效率。（4）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時，一般先用Ca2+溶液處理大腸桿菌，使細胞處于
能吸收周圍DNA分子
能吸收周圍DNA分子
的生理狀態(tài)即感受態(tài)。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸；0；供重組DNA的鑒定與選擇；PCR；5′；BamHⅠ；XhoⅠ；能吸收周圍DNA分子
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：19引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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