M基因編碼的M蛋白在動物A的肝細胞中特異性表達?，F(xiàn)設(shè)計實驗，將外源DNA片段F插入M基因的特定位置，再通過核移植、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術(shù)獲得M基因失活的轉(zhuǎn)基因克隆動物A，流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）在構(gòu)建含有片段F的重組質(zhì)粒過程中，切割質(zhì)粒DNA的工具酶是
限制酶
限制酶
；常用
顯微注射
顯微注射
方法將重組質(zhì)粒導入成纖維細胞。
（2）在無菌、無毒等適宜環(huán)境中進行動物A成纖維細胞的原代和傳代培養(yǎng)時，需要定期更換培養(yǎng)液，目的是
清除代謝廢物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害
清除代謝廢物，防止細胞代謝物積累對細胞自身造成危害
，在培養(yǎng)過程中細胞往往會貼壁生長這種現(xiàn)象稱為
細胞貼壁
細胞貼壁
。
（3）胚胎移植時的早期胚胎一般選
桑葚胚（桑椹胚）或囊胚
桑葚胚（桑椹胚）或囊胚
期的胚胎；移植后一般不會發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，原因是
受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)
受體對移入子宮的外來胚胎不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)
。
（4）以免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合，誘導融合的方法是
聚乙二醇或滅活的病毒誘導融合
聚乙二醇或滅活的病毒誘導融合
（答出一點即可）。篩選融合雜種細胞，制備M蛋白的單克隆抗體。簡要寫出利用此抗體確定克隆動物A中M基因是否失活的實驗思路
取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質(zhì)進行抗原-抗體雜交
取動物A和克隆動物A的肝組織細胞，分別提取蛋白質(zhì)進行抗原-抗體雜交
。
