p21蛋白是一種重要的細胞周期抑制因子，對家禽卵泡和肌肉發(fā)育、哺乳動物卵子成熟和胚胎發(fā)育均具有重要調節(jié)作用。為研究p2l基因對肌肉發(fā)育的調控機理，科研人員依據(jù)哺乳動物的p21基因保守序列（不同物種特定基因在進化過程中保持不變的序列）克隆了雞p21基因并開展相關研究。圖1為p21基因克隆及克隆產(chǎn)物與綠色熒光蛋白基因（GFP）構建融合基因表達載體過程示意圖，圖2為真核生物基因轉錄示意圖。請回答下列問題。
（1）家禽等鳥類生物與哺乳動物均具有序列高相似度的p21基因，從 分子分子水平上為生物進化論提供了有力的證據(jù)。結合圖1過程①的結果分析，p21基因保守序列最可能位于基因的 外顯子（編碼區(qū)）外顯子（編碼區(qū)）部位。
（2）RNA的穩(wěn)定性較低，細胞質中的RNA外切酶威脅著RNA的壽命。在真核細胞中，核基因經(jīng)圖2中過程②轉錄轉錄、加工形成的成熟mRNA，其3′-端通常具有幾十到幾百個腺苷酸構成的Poly（A）尾以進入細胞質，推測Poly（A）尾的作用可能是 維持mRNA的穩(wěn)定性、引導mRNA進入細胞質維持mRNA的穩(wěn)定性、引導mRNA進入細胞質。
（3）進行PCR1前需用TdT在cDNA的3′-端添加Poly（C）尾，原因是 便于引物的設計便于引物的設計；該過程中使用的TdT與DNA聚合酶在催化核苷酸鏈延伸上的差異為 TdT在催化時不需要模板TdT在催化時不需要模板。PCR2過程中采用的引物序列分別為 5′TTTTTT3′和5′CCGCTG3′片段5′TTTTTT3′和5′CCGCTG3′片段（寫出含6個堿基的序列即可）。PCR3中需要添加的物質有dNTP、無菌水、片段1及 片段2、TaqDNA聚合酶（耐高溫的DNA聚合酶）、擴增緩沖液（含Mg2+）片段2、TaqDNA聚合酶（耐高溫的DNA聚合酶）、擴增緩沖液（含Mg2+）（至少寫出2種）等。
（4）據(jù)圖1和下表分析，為保證p21cDNA和質粒正確連接，進行PCR4擴增時需要在引物的5′-端添加限制酶 BamHⅠ和HindⅢ；BamHⅠ和HindⅢ；的識別序列，實際操作過程中需要先對p21cDNA進行測序分析，原因是 p21cDNA可能存在需添加的限制酶識別序列p21cDNA可能存在需添加的限制酶識別序列。
限制酶的識別序列和切割位點
| EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | Sau3AⅠ | BclⅠ |
| G↓AATTC | G↓GATCC | A↓AGCTT | ↓GATC | T↓GATCA |
顯微注射
顯微注射
法，體外培養(yǎng)肌肉細胞時可通過觀察 綠色熒光分布
綠色熒光分布
初步分析p21蛋白在細胞周期調節(jié)過程的作用位置，為進一步分析提供參考。【答案】分子；外顯子（編碼區(qū)）；轉錄；維持mRNA的穩(wěn)定性、引導mRNA進入細胞質；便于引物的設計；TdT在催化時不需要模板；5′TTTTTT3′和5′CCGCTG3′片段；片段2、TaqDNA聚合酶（耐高溫的DNA聚合酶）、擴增緩沖液（含Mg2+）；BamHⅠ和HindⅢ；；p21cDNA可能存在需添加的限制酶識別序列；顯微注射；綠色熒光分布
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/11 8:0:9組卷：41引用：2難度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6