如圖所示為三種質(zhì)粒和一個(gè)含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍(lán)色顯色基因(能使含該基因的大腸桿菌菌落呈藍(lán)色)。圖中EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶,括號(hào)內(nèi)的數(shù)字表示限制酶切割位點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)據(jù)圖分析并回答問題:
(1)若需獲得圖中目的基因,可選用PvuⅠPvuⅠ限制酶。
(2)片段D是目的基因中的某一片段,下列敘述錯(cuò)誤的有abcabc(填字母)。
a.該圖中含有兩個(gè)密碼子
b.圖中③和④代表兩個(gè)不同的脫氧核苷酸
c.若只用該片段中的3個(gè)堿基對(duì),可以排列出43種片段
d.DNA聚合酶和DNA連接酶都可作用于②處,解旋酶作用中①處
(3)圖中最適合作為目的基因運(yùn)載體的質(zhì)粒是B,而A、C兩種質(zhì)粒不能作為運(yùn)載體的理由分別是A缺少標(biāo)記基因;質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí),復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割,會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制A缺少標(biāo)記基因;質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí),復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割,會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制。
(4)用目的基因和質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒后用EcoRⅠ完全酶切并進(jìn)行電泳觀察,可出現(xiàn)長度為1.1kb和5.65.6kb,或者3.13.1kb和3.63.6kb的片段。(重組質(zhì)粒上目的基因的插入位點(diǎn)與EcoRⅠ的識(shí)別位點(diǎn)之間的堿基對(duì)忽略不計(jì))
(5)將分別用限制酶PvuⅠ切開的質(zhì)粒B溶液與目的基因溶液混合,加入DNA連接酶連接后,并進(jìn)行導(dǎo)入大腸桿菌受體細(xì)胞的操作之后,從菌落的顏色和對(duì)抗生素抗性的角度分析,受體細(xì)胞的類型有33種。若菌落表現(xiàn)為具有氨芐青霉素抗性、不呈藍(lán)色,說明導(dǎo)入對(duì)應(yīng)受體細(xì)胞的DNA為重組質(zhì)粒(或質(zhì)粒B-目的基因連接)或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接重組質(zhì)粒(或質(zhì)粒B-目的基因連接)或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】PvuⅠ;abc;A缺少標(biāo)記基因;質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時(shí),復(fù)制原點(diǎn)會(huì)被限制酶切割,會(huì)影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制;5.6;3.1;3.6;3;重組質(zhì)粒(或質(zhì)粒B-目的基因連接)或質(zhì)粒B-質(zhì)粒B反向連接
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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