凝乳酶是食品生產(chǎn)中常用的凝結(jié)劑，科研人員從動物體內(nèi)獲得了凝乳酶mRNA，擬利用大腸桿菌通過基因工程生產(chǎn)凝乳酶。據(jù)下圖回答下列問題：
（1）利用凝乳酶mRNA，在 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，可以得到凝乳酶的cDNA，進一步通過PCR擴增時需要2種引物，引物的作用是 與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）。
（2）圖1和圖2是選用的質(zhì)粒及其幾種相關(guān)限制酶的識別位點，在構(gòu)建基因表達載體時，最好選用的限制酶是 EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠEcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ，這樣選擇的優(yōu)點是 避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）（答出兩點）。為在凝乳酶基因兩側(cè)加上相應(yīng)的酶切位點，設(shè)計引物時需在引物前添加相應(yīng)酶切位點，PCR過程中至少復(fù)制 33次可以得到含所需酶切位點的凝乳酶基因。
（3）將構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，需要用鈣離子處理，使大腸桿菌處于 感受態(tài)感受態(tài)。
（4）將在添加了青霉素的培養(yǎng)基中得到的4個大腸桿菌菌落，進行進一步檢測，檢測結(jié)果如圖3所示，1～4號菌落需要舍棄的是1號和 2號、3號2號、3號。其中舍棄1號菌落的理由是 目的基因未導(dǎo)入目的基因未導(dǎo)入。
（5）為滿足生產(chǎn)上的需要對凝乳酶進行改良，這種技術(shù)屬于 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程，該工程的改造的對象是 基因基因。
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；與模板單鏈結(jié)合延伸子鏈（使DNA聚合酶從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸）；EcoRⅠ、BglⅡ或EcoRⅠ、BamHⅠ；避免標(biāo)記基因被破壞、質(zhì)粒自身環(huán)化和目的基因的反向連接（確保目的基因與質(zhì)粒正向連接）；3；感受態(tài)；2號、3號；目的基因未導(dǎo)入；蛋白質(zhì)；基因
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：16引用：1難度：0.5
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1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對其計數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
2．回答下列關(guān)于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進行測定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會影響對SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測定結(jié)果
③缺乏，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進行測定．
表 試驗用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長規(guī)律，進行了如下操作．請回答下列問題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長通SO2的時間，同時逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長規(guī)律：在計數(shù)時，計數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進行計數(shù)時，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5
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