科研人員將寒帶地區(qū)海魚體內(nèi)的抗凍基因?qū)肭ъㄒ环N番茄品種)細(xì)胞,成功培育出抗凍千禧果。如圖為培育過程中使用的Ti質(zhì)粒示意圖,其中Vir區(qū)的基因活化能促進(jìn)T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移。回答下列問題:
(1)將抗凍基因的mRNA逆轉(zhuǎn)錄后,再進(jìn)行PCR可獲得抗凍基因,該過程中所需要的酶是
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶或耐高溫的DNA聚合酶
逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶或耐高溫的DNA聚合酶
。每次PCR循環(huán)分為3步,其中所需溫度最低的一步稱為 復(fù)性
復(fù)性
,PCR擴(kuò)增抗凍基因時(shí)需要添加特異性引物,目的是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸
。
(2)抗凍基因不能直接導(dǎo)入受體細(xì)胞,需要構(gòu)建抗凍基因表達(dá)載體。構(gòu)建抗凍基因表達(dá)載體的目的是 有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并遺傳給下一代;有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用
有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在,并遺傳給下一代;有利于抗凍基因在受體細(xì)胞中表達(dá)和發(fā)揮作用
(答出1點(diǎn))。
(3)選擇圖中Ti質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),不能選擇限制酶Ⅱ切割Ti質(zhì)粒,原因是 限制酶Ⅱ會破壞Vir區(qū)的基因,影響目的基因的轉(zhuǎn)移
限制酶Ⅱ會破壞Vir區(qū)的基因,影響目的基因的轉(zhuǎn)移
,最好選擇限制酶 Ⅲ
Ⅲ
構(gòu)建基因表達(dá)載體。
(4)為篩選成功導(dǎo)入抗凍基因的千禧果細(xì)胞,最好在培養(yǎng)基中添加 四環(huán)素
四環(huán)素
。將成功轉(zhuǎn)化的千禧果細(xì)胞誘導(dǎo)培育成植株,最后在 低溫(或寒冷)
低溫(或寒冷)
條件下篩選出具有抗凍性狀的千禧果植株。