人乳鐵蛋白(hLF)對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究,主要流程如圖,圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn),neor為新霉素抗性基因,BLG基因?yàn)棣?乳球蛋白基因,GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請回答:
(1)過程①中,不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR,是因?yàn)?!--BA-->
hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))
hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄(表達(dá))
。在RT-PCR過程中,加入的引物需在5'端添加SalI和BamHI
SalI和BamHI
兩種限制酶的識別序列,以便于hLF基因插入pEB中。
(2)過程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)
使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)
。過程③中,使用人工膜制成的脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞,依據(jù)的主要原理是生物膜具有一定的流動性
生物膜具有一定的流動性
。
(3)將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng),能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入pEB質(zhì)?;騪EBL質(zhì)粒
pEB質(zhì)?;騪EBL質(zhì)粒
的細(xì)胞,再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞中是否有綠色熒光
是否有綠色熒光
,以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
(4)要獲得轉(zhuǎn)基因山羊,還需要將成功表達(dá)hLF的乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到山羊去核的卵母
去核的卵母
細(xì)胞中,再借助早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植
早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植
技術(shù)孕育出羊羔。