人乳鐵蛋白（hLF）對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達(dá)載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點(diǎn)，neo^r為新霉素抗性基因，BLG基因?yàn)棣?乳球蛋白基因，GFP基因?yàn)榫G色熒光蛋白基因。請回答：

（1）過程①中，不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR，是因?yàn)?!--BA-->

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄（表達(dá)）

。在RT-PCR過程中，加入的引物需在5'端添加

SalI和BamHI

SalI和BamHI

兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEB中。
（2）過程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)

使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細(xì)胞中表達(dá)

。過程③中，使用人工膜制成的脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞，依據(jù)的主要原理是

生物膜具有一定的流動性

生物膜具有一定的流動性

。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入

pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒

pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒

的細(xì)胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞中

是否有綠色熒光

是否有綠色熒光

，以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
（4）要獲得轉(zhuǎn)基因山羊，還需要將成功表達(dá)hLF的乳腺上皮細(xì)胞的細(xì)胞核移植到山羊

去核的卵母

去核的卵母

細(xì)胞中，再借助

早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植

早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植

技術(shù)孕育出羊羔。