角蛋白酶（KerA）是降解角蛋白的酶類，在飼料工業(yè)中具有較大的應(yīng)用前景，但天然菌株產(chǎn)酶量低。為了獲得高效表達(dá)的KerA工程菌，研究者分別構(gòu)建了大腸桿菌和畢赤酵母工程菌，并實(shí)現(xiàn)了異源表達(dá)。如圖1為含KerA基因的外源DNA、質(zhì)粒的有關(guān)信息，EcoRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhoⅠ均為限制酶，Kanr、Tcr分別為卡那霉素抗性基因、四環(huán)素抗性基因。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題：
（1）為了獲取KerA基因，從天然菌株中提取相應(yīng)的DNA片段，再通過PCR技術(shù)大量擴(kuò)增，PCR技術(shù)的原理是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制。
（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過程中，應(yīng)該選用圖1中的 BamHⅠ和XhoⅠBamHⅠ和XhoⅠ限制酶切割外源DNA和質(zhì)粒DNA。
（3）將目的基因?qū)氪竽c桿菌時(shí)，常出現(xiàn)三種情況：未轉(zhuǎn)化的細(xì)菌、含空載體（普通質(zhì)粒）的細(xì)菌、含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。如圖是KerA大腸桿菌工程菌的篩選示意圖，結(jié)合圖1所獲得的重組質(zhì)粒分析：如圖2中的 B、DB、D（選用“A/B/C/D/E”字母作答）菌落為含有目的基因的“工程菌”。
（4）KerA基因在大腸桿菌和畢赤酵母工程菌是否實(shí)現(xiàn)異源表達(dá)，需要用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術(shù)檢測(cè)，但經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，只有畢赤酵母工程菌表達(dá)合成的KerA可直接投入使用，分析其原因是 畢赤酵母是具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來(lái)的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結(jié)構(gòu)）的蛋白質(zhì)畢赤酵母是具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來(lái)的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結(jié)構(gòu)）的蛋白質(zhì)。
（5）KerA在60℃以上時(shí)熱穩(wěn)定性差，限制了該酶的應(yīng)用范圍，研究人員在KerA的末端插入半胱氨酸，這不僅對(duì)酶活性影響小，且大大提高了其熱穩(wěn)定性。其運(yùn)用到的這種現(xiàn)代生物技術(shù)為 蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA雙鏈復(fù)制；BamHⅠ和XhoⅠ；B、D；抗原-抗體雜交；畢赤酵母是具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的真核生物，而大腸桿菌則沒有，前者能將翻譯出來(lái)的KerA肽鏈加工成具有活性（或空間結(jié)構(gòu)）的蛋白質(zhì)；蛋白質(zhì)工程
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：7引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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