在轉(zhuǎn)基因植株培育過程中，通常在利用除草劑抗性基因作為標(biāo)記基因?qū)D(zhuǎn)化細(xì)胞進(jìn)行篩選后，再將該類標(biāo)記基因刪除是提高轉(zhuǎn)基因植物生物安全性的重要措施之一。啤酒酵母中的FLP重組酶可以定點(diǎn)刪除位于兩個(gè)frt（短特異性靶DNA序列）之間的基因。研究人員將含frt位點(diǎn)的重組T質(zhì)粒A和含F(xiàn)LP重組酶基因的重組Ti質(zhì)粒B先后轉(zhuǎn)入煙草植株，再通過熱誘導(dǎo)處理，最終成功培育出了無綠黃?。ㄒ环N除草劑）基因（als）的轉(zhuǎn)基因耐鹽煙草植株。
回答下列問題：
（1）Ti質(zhì)粒中的T-DNA的作用是

（T-DNA）可整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上

（T-DNA）可整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上

。
（2）在構(gòu)建重組T質(zhì)粒A時(shí)，先選擇圖1中的引物

2、3

2、3

對als基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，再用

NcoⅠ、PstⅠ

NcoⅠ、PstⅠ

酶同時(shí)切割als基因和Ti質(zhì)粒A（圖2），并利用

DNA連接

DNA連接

酶連接形成重組Ti質(zhì)粒A。

（3）提取啤酒酵母的RNA，通過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

獲得

cDNA

cDNA

，再利用PCR擴(kuò)增出FLP重組酶基因。為便于構(gòu)建出重組Ti質(zhì)粒B（圖3），可在FLP重組酶基因PCR引物的

5’端

5’端

（5'端/3'端）加上BamHI和KpnⅠ酶的識別序列。
（4）通常采用

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法先后將重組Ti質(zhì)粒A和B轉(zhuǎn)入煙草細(xì)胞中，并在含

潮霉素、綠黃隆

潮霉素、綠黃隆

的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選出含重組Ti質(zhì)粒A和B的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
（5）相比于普通啟動(dòng)子，本實(shí)驗(yàn)選擇hsp啟動(dòng)子的優(yōu)勢是

可在篩選出轉(zhuǎn)基因植株后，再通過熱誘導(dǎo)將als基因切除

可在篩選出轉(zhuǎn)基因植株后，再通過熱誘導(dǎo)將als基因切除

。
（6）als基因長度約1.7kb,經(jīng)熱誘導(dǎo)被FLP重組酶成功切除后，其長度變?yōu)?.4kb。提取若干經(jīng)熱誘導(dǎo)處理的轉(zhuǎn)基因煙草植株的DNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其電泳檢測結(jié)果如圖4所示。圖中

1、3

1、3

（填數(shù)字）所對應(yīng)植株為成功切除als基因的轉(zhuǎn)基因煙草植株。