DNA分子雜交時(shí)，常需要大量的單鏈DNA探針。不對(duì)稱PCR是一種常見(jiàn)的單鏈DNA探針制備方法，其原理是反應(yīng)體系中加入一對(duì)數(shù)量不相等的引物。在PCR反應(yīng)的早期10-15個(gè)循環(huán)中，擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA，當(dāng)后期數(shù)量較少的限制性引物耗盡后，數(shù)量較多的非限制性引物將引導(dǎo)合成大量目標(biāo)DNA單鏈。
（1）若A鏈為所需的DNA分子探針，則非限制性引物應(yīng)選用引物 ⅣⅣ；PCR反應(yīng)緩沖體系中一般要添加 Mg2+Mg2+以激活耐高溫的DNA聚合酶。
（2）進(jìn)行最初10-15個(gè)循環(huán)的目的是 增加模板DNA的量增加模板DNA的量。如果體系中原模板DNA的數(shù)量為a,最初10次循環(huán)產(chǎn)物為雙鏈，后15次循環(huán)產(chǎn)物為單鏈，則最終獲得的單鏈探針數(shù)為 15×210?a15×210?a。因?yàn)镈NA單鏈與雙鏈的分子量不同，可通過(guò) （瓊脂糖凝膠）電泳（瓊脂糖凝膠）電泳將單鏈探針DNA分離出米。
（3）為精確控制產(chǎn)物生成量，科學(xué)家嘗試設(shè)計(jì)了較長(zhǎng)的非限制性引物與較短的限制性引物，在進(jìn)行一定的循環(huán)次數(shù)后，適當(dāng)提高復(fù)性溫度以避免殘留限制性引物與模板結(jié)合。高復(fù)性溫度條件下限制性引物不能結(jié)合模板鏈的原因是 引物越短，復(fù)性時(shí)可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞引物越短，復(fù)性時(shí)可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】Ⅳ；Mg2+；增加模板DNA的量；15×210?a；（瓊脂糖凝膠）電泳；引物越短，復(fù)性時(shí)可與模板鏈形成的氫鍵數(shù)越少，越容易被高溫破壞
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/9/9 0:0:8組卷：9引用：2難度：0.6
相似題
-
1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過(guò)程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）。可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過(guò)程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個(gè)目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個(gè)引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為。科研人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長(zhǎng)激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克?。?，可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：4引用：3難度：0.7
相關(guān)試卷