氫能是潛力巨大的可再生清潔能源。利用產(chǎn)氣腸桿菌制氫具有條件溫和、環(huán)保等優(yōu)點。E.as菌是產(chǎn)氫率較高的菌種，為進一步提高其產(chǎn)氫率，科研人員開展了相關(guān)研究?；卮鹣铝袉栴}。
（1）為獲得 E.as菌純培養(yǎng)物，可采用

平板劃線（或稀釋涂布平板）

平板劃線（或稀釋涂布平板）

法進行純培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，設(shè)置未接種的平板作為對照，這樣做的目的是

檢測培養(yǎng)過程中是否被雜菌污染

檢測培養(yǎng)過程中是否被雜菌污染

。
（2）為確定 E.as菌產(chǎn)氫率的最適溫度，某同學(xué)進行了相關(guān)實驗，請簡要寫出實驗思路。

在一定溫度范圍內(nèi)設(shè)置一系列溫度梯度，其他條件相同且適宜的條件下，分別培養(yǎng)等量的E.as菌，一段時間后分別測定各組E.as菌的產(chǎn)氫率。若測得的數(shù)據(jù)出現(xiàn)峰值，則峰值所對應(yīng)的溫度即為該菌的最適產(chǎn)氫溫度。否則，擴大溫度范圍，繼續(xù)實驗，直到出現(xiàn)峰值。（或：產(chǎn)氫率最高時所對應(yīng)的溫度為該菌的最適產(chǎn)氫溫度。）

在一定溫度范圍內(nèi)設(shè)置一系列溫度梯度，其他條件相同且適宜的條件下，分別培養(yǎng)等量的E.as菌，一段時間后分別測定各組E.as菌的產(chǎn)氫率。若測得的數(shù)據(jù)出現(xiàn)峰值，則峰值所對應(yīng)的溫度即為該菌的最適產(chǎn)氫溫度。否則，擴大溫度范圍，繼續(xù)實驗，直到出現(xiàn)峰值。（或：產(chǎn)氫率最高時所對應(yīng)的溫度為該菌的最適產(chǎn)氫溫度。）

（3）E.as菌細胞中hycA基因表達會抑制產(chǎn)氫代謝，科研人員通過同源重組方式使hycA蛋白失活，獲得了產(chǎn)氫率更高的工程菌E.as?A，其技術(shù)流程如圖所示。

①過程Ⅰ中可采用

Ca²⁺處理

Ca²⁺處理

法處理E.as菌，以促進DNA片段P的導(dǎo)入。
②過程Ⅱ中，同源重組導(dǎo)致hycA蛋白失活，其機制是

DNA片段P與hycA基因發(fā)生同源重組，使hycA基因發(fā)生突變，導(dǎo)致該基因不能表達或表達的蛋白質(zhì)發(fā)生改變，使其不能發(fā)揮作用

DNA片段P與hycA基因發(fā)生同源重組，使hycA基因發(fā)生突變，導(dǎo)致該基因不能表達或表達的蛋白質(zhì)發(fā)生改變，使其不能發(fā)揮作用

。依據(jù)基因工程原理，采取其他手段也可達到同樣的失活效果，可采用的其他手段有

基因敲除（或轉(zhuǎn)反義基因，或RNA干擾）

基因敲除（或轉(zhuǎn)反義基因，或RNA干擾）

（寫出一項即可）。
③過程Ⅲ應(yīng)將菌種接種到含有

卡那霉素（和氯霉素）

卡那霉素（和氯霉素）

的培養(yǎng)基上進行篩選，最終獲得E.as-A工程菌。