圖示PIJ702是一種常用質粒，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而三種限制酶SacⅠ、SphⅠ、BglⅡ在pIJ702上分別只有一處識別序列。回答下列問題。
（1）限制性核酸內(nèi)切酶可以識別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵斷裂，切割形成的末端有黏性末端和平末端黏性末端和平末端兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取目的基因，與質粒pIJ702上長度為0.4kb的SacⅠ/SphⅠ片段進行置換，構建重組質粒pZHZ8。通常用兩種限制酶切割目的基因和質粒，而不用單酶切的原因是防止目的基因的錯誤連接（或防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質粒的反向連接）防止目的基因的錯誤連接（或防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質粒的反向連接）。上述兩種質粒經(jīng)限制酶BglⅡ酶切后分別得到長度為5.7kb、6.7kb的DNA片段。由此判斷目的基因的片段長度為1.41.4kb。
（3）導入目的基因時，首先用Ca2+處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細胞，再將重組質粒pZHZ8溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下可以促進鏈霉菌完成轉化轉化過程。
（4）不含質粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長狀況如上表所示。若要篩選導入pZHZ8的鏈霉菌細胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應在55μg/mL以上，挑選成功導入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是根據(jù)導入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選根據(jù)導入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選。
| 固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（ug/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含質粒的鏈霉菌生長狀況 | +++++ | ++++ | + | - | - |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】磷酸二酯鍵；黏性末端和平末端；防止目的基因的錯誤連接（或防止質粒和目的基因的自身環(huán)化及目的基因與質粒的反向連接）；1.4；轉化；5；根據(jù)導入plJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導入pZHZ8的鏈霉菌菌落呈白色的特點，通過觀察菌落的顏色進行挑選
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：13引用：1難度：0.7
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
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