Cre/loxP重組酶系統(tǒng)是在基因或染色體水平上對(duì)生物基因進(jìn)行遺傳改造的一種技術(shù)，可以在DNA的特定序列進(jìn)行定點(diǎn)切割和重新連接。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）圖1是利用Cre/loxP酶系統(tǒng)敲除基因的過(guò)程。loxP序列具有方向性，由中間的間隔序列和兩側(cè)的反向重復(fù)序列組成，其中決定方向的序列是

間隔序列

間隔序列

。圖1中一條DNA片段上待敲除基因的兩端存在同向loxP序列，Cre酶能識(shí)別并結(jié)合到loxP序列的反向重復(fù)序列區(qū)，定點(diǎn)切斷間隔序列的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的敲除，敲除的基因片段會(huì)形成

環(huán)狀

環(huán)狀

（填“線狀”或“環(huán)狀”）結(jié)構(gòu)。若經(jīng)Cre酶作用使得2個(gè)loxP位點(diǎn)間的序列發(fā)生反轉(zhuǎn)，其原因可能是

兩個(gè)loxP序列方向相反

兩個(gè)loxP序列方向相反

。
（2）Cre/loxP酶系統(tǒng)可以調(diào)控基因的表達(dá)，在目的基因

上游

上游

（填“上游”或“下游”）插入一個(gè)帶有l(wèi)oxP位點(diǎn)的編碼終止密碼子的序列，在Cre酶存在的情況下，目的基因

表達(dá)

表達(dá)

（填“表達(dá)”或“不表達(dá)”）。
（3）圖2是利用Cre/loxP酶系統(tǒng)構(gòu)建融合基因的過(guò)程。首先分別擴(kuò)增Bt基因和Bar基因，以獲得所需要的DNA片段，然后用Cre/loxP酶系統(tǒng)處理連接后的DNA片段，獲得Bt-Bar融合基因片段。PCR1過(guò)程中，所用的2種引物的結(jié)合位置分別在

啟動(dòng)子外側(cè)和終止子內(nèi)側(cè)（啟動(dòng)子和終止子的左側(cè)）

啟動(dòng)子外側(cè)和終止子內(nèi)側(cè)（啟動(dòng)子和終止子的左側(cè)）

；該過(guò)程中，還需添加的物質(zhì)有

TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg²⁺）緩沖液等

TaqDNA聚合酶、dNTP、（含Mg²⁺）緩沖液等

（至少寫(xiě)2種）等。有研究表明，大多數(shù)限制酶對(duì)裸露的位點(diǎn)不能識(shí)別切割，因此必須對(duì)識(shí)別序列5'末端進(jìn)行修飾并加上一個(gè)至幾個(gè)保護(hù)堿基，如GGG。由此推測(cè)，對(duì)Bar基因引物5′端序列的要求是

引物的5'端均要連接上loxP序列，并在末端加上保護(hù)堿基序列（GGG）

引物的5'端均要連接上loxP序列，并在末端加上保護(hù)堿基序列（GGG）

。