現(xiàn)代基因編輯CRISPR/Cas9技術(shù)可以對生物的DNA序列進行定點切割。將編碼Cas9酶和sgRNA的基因作為外源基因構(gòu)建基因表達載體后，導(dǎo)入受體細胞，可將細胞內(nèi)某個基因定向敲除，其作用機理如圖所示。請回答問題。
（1）sgRNA與Cas9酶是一個功能復(fù)合體。如圖所示，sgRNA有引導(dǎo)作用，與A基因中部分序列堿基互補配對，Cas9酶在配對區(qū)域定點切割，導(dǎo)致A基因發(fā)生堿基對 缺失缺失，基因喪失功能。sgRNA與Cas9酶的聯(lián)合作用類似于 限制限制酶的作用。如果要獲得基因敲除動物個體，應(yīng)以 受精卵受精卵作為受體細胞，用 顯微注射顯微注射法導(dǎo)入CRISPR/Cas9基因表達載體。
（2）研究人員擔(dān)心基因編輯發(fā)生“脫靶效應(yīng)”，導(dǎo)致其他非目標基因發(fā)生突變，我國科學(xué)家對此進行了檢測。在小鼠受精卵分裂為兩個細胞時，向其中一個細胞注入基因編輯工具，之后將此胚胎移植入母鼠子宮，待其發(fā)育到14天時，將胚胎取出，把胚胎的細胞全部分散開，分成基因編輯細胞后代和非基因編輯細胞后代兩個細胞群，分別提取DNA，測序、比對。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas9技術(shù)的脫靶率很低，而另一類單堿基突變系統(tǒng)的基因編輯技術(shù)脫靶率極高。
①用同一受精卵分裂形成的兩個細胞作為處理對象和對照，優(yōu)點是 這兩個細胞的基因序列相同，避免因?qū)嶒灲M和對照組細胞原有的基因序列差異掩蓋“脫靶效應(yīng)”這兩個細胞的基因序列相同，避免因?qū)嶒灲M和對照組細胞原有的基因序列差異掩蓋“脫靶效應(yīng)”。
②利用二細胞胚胎分裂產(chǎn)生的子細胞DNA作為測序?qū)ο?，而不是將實驗組細胞和對照組細胞DNA進行PCR擴增后測序，原因是 PCR擴增會產(chǎn)生較多的復(fù)制錯誤，掩蓋“脫靶效應(yīng)”PCR擴增會產(chǎn)生較多的復(fù)制錯誤，掩蓋“脫靶效應(yīng)”。
③為方便將基因編輯細胞后代和非基因編輯細胞后代分開，可在構(gòu)建基因表達載體時 利用某種熒光蛋白基因作為標記基因利用某種熒光蛋白基因作為標記基因。
（3）基因編輯的“脫靶效應(yīng)”可能對被編輯個體帶來什么不良影響？如果脫靶效應(yīng)發(fā)生在原癌基因，可能導(dǎo)致細胞癌變如果脫靶效應(yīng)發(fā)生在原癌基因，可能導(dǎo)致細胞癌變。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】缺失；限制；受精卵；顯微注射；這兩個細胞的基因序列相同，避免因?qū)嶒灲M和對照組細胞原有的基因序列差異掩蓋“脫靶效應(yīng)”；PCR擴增會產(chǎn)生較多的復(fù)制錯誤，掩蓋“脫靶效應(yīng)”；利用某種熒光蛋白基因作為標記基因；如果脫靶效應(yīng)發(fā)生在原癌基因，可能導(dǎo)致細胞癌變
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/23 20:38:36組卷：8引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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