設(shè)計引物是PCR技術(shù)中至關(guān)重要的一環(huán)。設(shè)計的引物能與模板鏈目的位點互補結(jié)合，但不能在非目的位點與DNA結(jié)合，要防止引物之間或自身互補配對形成二聚體或折疊后互補配對形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)?；卮鹣铝杏嘘P(guān)引物及引物設(shè)計的問題：
（1）PCR中，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。
（2）圖1所示的引物中，其中一種設(shè)計不合理，原因是

引物Ⅰ折疊后會發(fā)生堿基互補配對形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)

引物Ⅰ折疊后會發(fā)生堿基互補配對形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)

。

（3）DNA分子雜交時需要單鏈DNA探針，常用不對稱PCR來制備。不對稱PCR中使用的一對引物的量不相等，其中少的稱為限制性引物，多的稱為非限制性引物，開始擴增出的是雙鏈DNA，后來擴增出的是單鏈DNA．圖2中，α鏈為所需的DNA分子探針，應(yīng)選用引物

Ⅳ

Ⅳ

作非限制性引物；已知圖示DNA有n個，前10次循環(huán)的產(chǎn)物為雙鏈DNA，后10次循環(huán)的產(chǎn)物是單鏈DNA，則最終可獲得

n×2¹⁰

n×2¹⁰

個所需的單鏈探針；常用

脂糖凝膠電泳

脂糖凝膠電泳

法來鑒定PCR的產(chǎn)物。
（4）圖3表示利用基因工程生產(chǎn)某藥用蛋白過程中使用的質(zhì)粒及目的基因的部分結(jié)構(gòu)，β-半乳糖苷酶能分解無色的X-gal產(chǎn)生藍色物質(zhì)。圖中顯示，氨芐青霉素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因、目的基因的序列中分別含有1種、5種、2種限制酶的識別序列及切割位點。
在設(shè)計PCR引物時添加限制酶

XhoⅠ和MunⅠ

XhoⅠ和MunⅠ

的識別序列，使擴增得到的目的基因首端、末端能分別被這兩種酶識別并剪切，得到與質(zhì)粒相同的黏性末端，以確保目的基因與質(zhì)粒載體正確連接。寫出篩選出成功導(dǎo)入目的基因的工程菌的思路：

大腸桿菌與重組質(zhì)粒混合培養(yǎng)，一段時間后，將其接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌

大腸桿菌與重組質(zhì)?；旌吓囵B(yǎng)，一段時間后，將其接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌

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