如圖表示某種綠色熒光蛋白基因表達載體的構(gòu)建過程,綠色熒光蛋白基因有720個堿基對(bp),質(zhì)粒有5369個堿基對(bp)。請據(jù)圖回答問題:
(1)質(zhì)粒中“氨芐青霉素抗性基因”的作用是 便于篩選目的基因是否導(dǎo)入受體細胞便于篩選目的基因是否導(dǎo)入受體細胞。研究發(fā)現(xiàn)復(fù)制原點處的A和T特別多,有利于DNA復(fù)制時 解旋解旋過程的發(fā)生。
(2)限制酶 BamHⅠ的識別序列和切割位點是 G↓GATCC,該酶切形成的黏性末端是 —CTAG—CTAG。過程③所需的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。
(3)已知圖中質(zhì)粒經(jīng) BamHⅠ、HindⅢ雙酶切后進行電泳,出現(xiàn)了一條長度為5300bp的DNA條帶,則重組質(zhì)粒的長度為 6020bp6020bp的DNA片段條帶。
(4)過程①用兩種限制酶切割質(zhì)粒,與單一酶切相比,其優(yōu)勢有 可以避免目的基因自身環(huán)化;可使目的基因定向插入到運載體中可以避免目的基因自身環(huán)化;可使目的基因定向插入到運載體中。過程②通過 PCR技術(shù)實現(xiàn),進行 PCR時,需要在兩種引物的 5'5'端分別添加 BamHⅠ和 HindⅢ的識別序列。
(5)將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌前,要用 CaCl2處理大腸桿菌,其目的是 使大腸桿菌處于感受態(tài)(或處于容易吸收DNA的狀態(tài))使大腸桿菌處于感受態(tài)(或處于容易吸收DNA的狀態(tài));進行篩選時,大腸桿菌培養(yǎng)基中除需要加入水、無機鹽、C源、N源、瓊脂等物質(zhì)外,還要分別添加 四環(huán)素、氨芐青霉素四環(huán)素、氨芐青霉素。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】便于篩選目的基因是否導(dǎo)入受體細胞;解旋;—CTAG;DNA連接酶;6020bp;可以避免目的基因自身環(huán)化;可使目的基因定向插入到運載體中;5';使大腸桿菌處于感受態(tài)(或處于容易吸收DNA的狀態(tài));四環(huán)素、氨芐青霉素
【解答】
【點評】
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