中國甜柿的自然脫澀與乙醛代謝關(guān)鍵酶基因(PDC)密切相關(guān),推測澀味程度可能與PDC基因的表達(dá)情況有關(guān)。
(1)啟動子位于基因首端,是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點,同時啟動子區(qū)域還存在著許多調(diào)控蛋白的結(jié)合位點,RNA聚合酶和調(diào)控蛋白共同影響了基因的 轉(zhuǎn)錄水平轉(zhuǎn)錄水平。
(2)為篩選PDC基因的調(diào)控蛋白,科研人員進行了下列實驗。
①PDC基因的啟動子序列未知,為獲得大量該基因啟動子所在片段,可利用限制酶將基因組DNA進行酶切,然后在 DNA連接酶DNA連接酶的作用下將已知序列信息的接頭片段連接在PDC基因的上游,根據(jù) 接頭片段接頭片段和PDC基因編碼序列設(shè)計引物進行PCR.利用質(zhì)粒A(圖1)構(gòu)建含有PDC基因啟動子片段的重組質(zhì)粒并導(dǎo)入代謝缺陷型酵母菌,用不含 尿嘧啶尿嘧啶的培養(yǎng)基可篩選出成功轉(zhuǎn)化的酵母菌Y1H。
②質(zhì)粒G(圖2)上的AD基因表達(dá)出的AD蛋白與啟動子足夠靠近時,能夠激活后續(xù)基因轉(zhuǎn)錄,因此需獲得待測蛋白與AD蛋白的融合蛋白用于后續(xù)篩選??蒲腥藛T從中國甜柿中提取RNA,將逆轉(zhuǎn)錄形成的各種cDNA與質(zhì)粒G連接后導(dǎo)入酵母菌,此時應(yīng)選擇質(zhì)粒G中的位點 44(填序號1~5)作為cDNA的插入位點,最終獲得攜帶不同cDNA片段的酵母菌群Y187。
③重組酵母Y187與Y1H能夠進行接合生殖,形成的接合子含有兩種酵母菌質(zhì)粒上的所有基因。若接合子能在含有金擔(dān)子素的培養(yǎng)基中生存,則推測待測蛋白是PDC基因的調(diào)控蛋白,請結(jié)合圖示闡述作出該推測的理由。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】轉(zhuǎn)錄水平;DNA連接酶;接頭片段;尿嘧啶;4
【解答】
【點評】
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