二十碳五烯酸（EPA）能促進(jìn)體內(nèi)飽和脂肪酸代謝，是人體自身不能直接從頭合成但又不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。獲取EPA產(chǎn)品的主要途徑是從魚油等海洋漁業(yè)資源中提取。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)從海洋細(xì)菌中提取了EPA合成途徑的關(guān)鍵基因pfaB，并將其導(dǎo)入酵母菌內(nèi)，通過酵母菌發(fā)酵生產(chǎn)EPA，相關(guān)過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題：
（1）PCR技術(shù)遵循的基本原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，在第 三三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段（pfaB基因）。
（2）利用PCR擴(kuò)增pfaB基因時(shí)，需將溫度上升到90℃后再降溫至50℃，其目的是 使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合。
（3）表達(dá)載體含有啟動(dòng)子，啟動(dòng)子是指 位于基因首端的一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA位于基因首端的一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
（4）將pfaB-pPIC9表達(dá)載體導(dǎo)入酵母菌前，需先將表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌并進(jìn)行篩選，篩選時(shí)培養(yǎng)基中應(yīng)加入 氨芐青霉素氨芐青霉素，再將含有表達(dá)載體的大腸桿菌與酵母菌置于電轉(zhuǎn)杯中，通過電激將大腸桿菌導(dǎo)入酵母菌，該表達(dá)載體在酵母菌中不會(huì)隨著酵母菌繁殖而丟失的原因是 表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；三；使pfaB基因雙鏈解旋為單鏈后，便于引物與模板鏈通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合；位于基因首端的一段特殊的DNA序列，是RNA聚合酶識(shí)別及結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA；氨芐青霉素；表達(dá)載體上含有真核生物復(fù)制原點(diǎn)，能在酵母菌中復(fù)制
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/7 8:0:9組卷：0引用：1難度：0.6
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列。回答下列問題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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