基因工程可以賦予生物新的性狀，科研人員利用基因工程技術(shù)以期待獲得具備抗旱特性的小麥。請回答下列問題：
（1）研究發(fā)現(xiàn)，某些植物的種子脫水?dāng)?shù)十年后復(fù)水仍能夠恢復(fù)活性，原因是細(xì)胞中積累海藻糖。科研人員擬將酵母菌的海藻糖合成酶基因（TPS）轉(zhuǎn)入小麥中。圖標(biāo)注了載體TPS基因的酶切位點(diǎn)和預(yù)期的基因表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)，表格列舉了限制酶的識別序列。
| 酶 | 識別序列 |
| BamHⅠ | 5′GGATCC3′ |
| SacⅠ | 5′GAGCTC3′ |
| HindⅢ | 5′AAGCTT3′ |
| XbaⅠ | 5′TCTAGA3′ |
DNA連接
DNA連接
酶將TPS基因拼接到載體的切口處，形成基因表達(dá)載體。②從圖分析，在TPS基因兩側(cè)引入的是
BamHI、SacI
BamHI、SacI
限制酶的酶切位點(diǎn)。設(shè)計(jì)的引物序列為 5’-GGATCCGAATCGAACGATTAGCAACT、5’-GAGCTCAGCCTAACGTACAAGTTCGT
5’-GGATCCGAATCGAACGATTAGCAACT、5’-GAGCTCAGCCTAACGTACAAGTTCGT
。（2）圖中Bar基因是抗除草劑基因。基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入細(xì)胞后，在獲得的植株葉片上涂抹除草劑，篩選出7株抗除草劑個(gè)體。Bar基因作為載體上的
標(biāo)記
標(biāo)記
基因輔助篩選TPS轉(zhuǎn)基因植株。（3）現(xiàn)對篩選出的抗除草劑個(gè)體進(jìn)行DNA水平的檢測。請?zhí)顚懕砀瘢瓿蓪?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：
| 組別 | 植株編號1-7 | 對照組1 | 對照組2 |
| 模板 | ① （提取的）1-7號植株DNA （提取的）1-7號植株DNA |
基因表達(dá)載體或TPS基因片段 | ② 空質(zhì)粒載體 空質(zhì)粒載體 |
| PCR體系中其他物質(zhì) | 擴(kuò)增緩沖液、水、引物、③ 4種脫氧核苷酸（或dNTP） 4種脫氧核苷酸（或dNTP） 、④Taq酶 Taq酶 |
||
| 電泳預(yù)期結(jié)果 | ⑤ 有條帶 有條帶 |
有條帶 | 沒有條帶 |
RR
RR
。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA連接；BamHI、SacI；5’-GGATCCGAATCGAACGATTAGCAACT、5’-GAGCTCAGCCTAACGTACAAGTTCGT；標(biāo)記；（提取的）1-7號植株DNA；空質(zhì)粒載體；4種脫氧核苷酸（或dNTP）；Taq酶；有條帶；RR
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/8/9 8:0:9組卷：75引用：8難度：0.6
相似題
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1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個(gè)引物對應(yīng)的局部序列（前10個(gè)堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個(gè)初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個(gè)。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時(shí)構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個(gè)文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動子是聚合酶識別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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