四環(huán)素被廣泛應(yīng)用于治療動(dòng)物的細(xì)菌感染，但殘留在動(dòng)物組織中的四環(huán)素通過食物鏈進(jìn)入人體，會(huì)影響人類健康?？蒲腥藛T獲得了如?圖 1 所示的 DNA 片段，用于構(gòu)建可檢測四環(huán)素的大腸桿菌。

（1）啟動(dòng)子 A 和啟動(dòng)子 B都是一段有特殊堿基序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，均含有

RNA聚合

RNA聚合

酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。
（2）為將片段1和片段2連接，需使用

ClaⅠ和DNA連接酶

ClaⅠ和DNA連接酶

酶處理二者。在答題卡的框中畫出二者連接后形成的融合基因（標(biāo)注啟動(dòng)子、基因、終止子和酶切位點(diǎn)）

。
（3）為將融合基因構(gòu)建進(jìn)入圖2所示的載體質(zhì)粒中，應(yīng)使用限制酶

SpeⅠ和BamHⅠ

SpeⅠ和BamHⅠ

切割載體質(zhì)粒，用限制酶

XbaⅠ和BamHⅠ

XbaⅠ和BamHⅠ

切割融合基因，選擇上述限制酶的理由是

XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可將融合基因左側(cè)連入載體；BamHⅠ切割可將融合基因右側(cè)連入載體

XbaⅠ和SpeⅠ可切出相同的黏性末端，可將融合基因左側(cè)連入載體；BamHⅠ切割可將融合基因右側(cè)連入載體

。
（4）利用Ca²+處理大腸桿菌使之處于

易于接受外源DNA

易于接受外源DNA

的狀態(tài)，獲得含有圖示序列的表達(dá)載體。
（5）寫出判定轉(zhuǎn)基因大腸桿菌可檢測的最低四環(huán)素濃度的實(shí)驗(yàn)思路，并預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)思路：配制一系列含不同濃度四環(huán)素的培養(yǎng)基用于培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，觀察大腸桿菌中綠色熒光強(qiáng)度。
預(yù)期結(jié)果：能出現(xiàn)綠色熒光的最低四環(huán)素濃度，即為其可檢測的最低濃度

實(shí)驗(yàn)思路：配制一系列含不同濃度四環(huán)素的培養(yǎng)基用于培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因大腸桿菌，觀察大腸桿菌中綠色熒光強(qiáng)度。
預(yù)期結(jié)果：能出現(xiàn)綠色熒光的最低四環(huán)素濃度，即為其可檢測的最低濃度

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