普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（ChMmaA2），能在纖維細胞中特異性表達，產生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構建了反義GhMnaA2基因表達載體，利用農桿菌轉化法導入棉花細胞，成功獲得轉基因棉花品種，具體過程如圖。請分析回答：
（1）纖維細胞E6啟動子的元素組成為 C、H、O、N、PC、H、O、N、P基因表達載體除了圖示組成外，至少還有 復制原點、終止子、標記基因復制原點、終止子、標記基因等（至少答兩個），不能使用質粒1中花椰菜病毒啟動子的原因是 纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉錄產生mRNA纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉錄產生mRNA
（2）PCR技術擴增β-甘露糖苷酶基因需要根據 GhMnaA2兩端部分核苷酸序列GhMnaA2兩端部分核苷酸序列，設計特異性引物序列，假設開始時模板DNA數(shù)量為m個，PCR擴增5個循環(huán)，理論上需要的引物數(shù)量 62m62m，為保證ChMnaA2能插入到質粒2中，還需要在引物的 5′5′端添加限制酶識別序列。
（3）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切割正義基因表達載體獲得0.1kb、3.2kb、5.8kb、8.6kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應是5.9kb5.9kb和 11.8kb11.8kb。
（4）導入細胞內的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維變長的原理是 反義GhMnaA2轉錄的反義RNA能與棉花細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達反義GhMnaA2轉錄的反義RNA能與棉花細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】C、H、O、N、P；復制原點、終止子、標記基因；纖維細胞中的RNA聚合酶不能識別和結合花椰菜病毒啟動子，反義GhMnaA2不能轉錄產生mRNA；GhMnaA2兩端部分核苷酸序列；62m；5′；5.9kb；11.8kb；反義GhMnaA2轉錄的反義RNA能與棉花細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/16 8:0:10組卷：11引用：2難度：0.5
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
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