巴斯德畢赤酵母菌是一種甲醇營養(yǎng)型酵母,能以甲醇作為唯一碳源。啟動子(5′AOX1)可在甲醇的誘導下,使外源基因在該種畢赤酵母菌中得到高效表達。現擬利用此酵母菌生產人胰島素,請分析并回答下列問題:
(1)由于5′AOX1的首端及其上游堿基序列未知,因此在利用PCR技術擴增5′AOX1之前,進行了下圖所示的處理,據圖回答:①過程使用的兩種酶是 酶1和DNA連接酶酶1和DNA連接酶,②過程利用 酶2酶2(填“酶1”或“酶2”)完成。若用酶1和酶2同時切割片段2和片段3并將其產物分別進行電泳,得到的條帶 相同相同(填“相同”或“不相同”)。
(2)引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸。片段3經過三輪復制后,產生的8個雙鏈DNA片段有 55種。
(3)基因表達載體中,5′AOX1應位于人胰島素基因的 上游上游,是 RNA聚合酶RNA聚合酶識別與結合的部位。為使人胰島素基因在畢赤酵母菌中高效表達,培養(yǎng)基中應添加誘導物 甲醇甲醇。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】酶1和DNA連接酶;酶2;相同;使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸;5;上游;RNA聚合酶;甲醇
【解答】
【點評】
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