某科研團(tuán)隊利用小鼠篩選獲得一種針對禽流感病毒的鼠源單克隆抗體13D4。為了降低其應(yīng)用于人體治療時可能產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)，將其改造為人-鼠嵌合抗體13D4-cAb,之后將構(gòu)建好的真核表達(dá)載體導(dǎo)入中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO 細(xì)胞）后，篩選能夠穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株，通過轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)、表達(dá)，純化后獲得大量嵌合抗體用于研究。請根據(jù)資料回答下列問題：
（1）研究人員從分泌13D4單克隆抗體的 雜交瘤雜交瘤細(xì)胞中提取總RNA或mRNA，經(jīng)處理得到輕、重鏈抗原結(jié)合區(qū)的cDNA用于 PCR擴(kuò)增，并分別與人抗體輕、重鏈生物反應(yīng)區(qū)DNA序列拼接，構(gòu)建人-鼠嵌合抗體13D4-cAb的真核表達(dá)載體用于表達(dá)。
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入CHO細(xì)胞后，可采用 分子雜交分子雜交技術(shù)檢驗(yàn)輕、重鏈基因是否成功轉(zhuǎn)錄，最后還需要通過 抗原--抗體雜交抗原--抗體雜交技術(shù)檢驗(yàn)?zāi)康幕蚴欠癯晒Ρ磉_(dá)并組裝出有生物學(xué)活性的嵌合抗體。
（3）應(yīng)用轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)篩選獲得的細(xì)胞，需將轉(zhuǎn)瓶放入CO2培養(yǎng)箱，以維持37℃和5% CO2等培養(yǎng)條件，合成培養(yǎng)基中通常還需加入 血清血清或血漿等一些天然成分。為避免出現(xiàn)細(xì)胞的 接觸抑制接觸抑制現(xiàn)象，當(dāng)細(xì)胞鋪滿轉(zhuǎn)瓶內(nèi)壁約80%左右時，應(yīng)當(dāng)使用 胰蛋白酶胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
（4）PCR反應(yīng)體系中，若一個模板DNA消耗引物分子14個，則該DNA擴(kuò)增了 33輪。
（5）上述嵌合抗體的生產(chǎn)體現(xiàn)了 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程技術(shù)的應(yīng)用。
【考點(diǎn)】動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件與過程；單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】雜交瘤；分子雜交；抗原--抗體雜交；血清；接觸抑制；胰蛋白酶；3；蛋白質(zhì)
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：54引用：2難度：0.7
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1．動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的基本技術(shù)，下列關(guān)于這兩項(xiàng)技術(shù)的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：29引用：2難度：0.7 -
2．回答與基因工程、動物克隆和胚胎工程有關(guān)的問題：
（1）幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力。在進(jìn)行基因工程操作時，可以從植物體中提取幾丁質(zhì)酶的mRNA，以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是。若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。
（2）為了提高動物成纖維細(xì)胞克隆形成率，可以選擇適宜的培養(yǎng)基、添加牛血清、以支持生長等措施。當(dāng)?shù)谝粋€卡氏瓶中的細(xì)胞濃度不再增加時，若要細(xì)胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是。
（3）下列關(guān)于胚胎工程的敘述，錯誤的是
A．在動物的飼料中添加一定量的促性腺激素促使超數(shù)排卵
B．若在囊胚期進(jìn)行胚胎分割，內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均等分割，滋養(yǎng)成則不必
C．可以從雌性動物體內(nèi)卵泡處吸取卵泡液，取出卵母細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)成熟
D．胚胎成纖維細(xì)胞可以用于胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)，因?yàn)槠淠芊置谝种萍?xì)胞分化的物質(zhì)。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：3引用：1難度：0.7 -
3．據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟最新數(shù)據(jù)，2021年全球約5.37億成人患有糖尿病，670萬成人因糖尿病或其并發(fā)癥死亡。如圖是研究人員提出的治療方案，請回答下列問題：
（1）從患者體內(nèi)獲得體細(xì)胞后，對其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱為，培養(yǎng)的細(xì)胞在貼壁生長至鋪滿培養(yǎng)皿底時停止分裂，這種現(xiàn)象稱為。一般來說，動物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有（少答出兩點(diǎn)）。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增正常胰島素基因的前提條件是。目前臨床用的胰島素生效較慢，科學(xué)家將胰島素β鏈的第28和29個氨基酸調(diào)換順序，成功獲得了速效胰島素。生產(chǎn)速效胰島素，需要對進(jìn)行定向改造。
A.胰島素
B.胰島素mRNA
C.胰島素基因
D.胰島
（3）欲檢測胰島類似細(xì)胞是否具有胰島B細(xì)胞的正常生理功能，可設(shè)計如下實(shí)驗(yàn)：將等量的胰島類似細(xì)胞與正常胰島B細(xì)胞分別加入兩組相等濃度的培養(yǎng)液中，適宜且相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一段時間后分別檢測兩組培養(yǎng)液中。
（4）該治療糖尿病的方法與異體移植相比，突出的優(yōu)點(diǎn)是。發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：35引用：2難度：0.6
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