人乳頭瘤病毒HPV是雙鏈DNA病毒，可以引起人皮膚黏膜上皮增生。HPV病毒的DNA分子與健康細胞的細胞核結(jié)合，利用細胞產(chǎn)生出兩種蛋白E6、E7，它們會附著在抑癌基因p53和pRb上，并關(guān)閉它們的功能。默沙東九價HPV疫苗是利用釀酒酵母菌進行生產(chǎn)。
（1）相較于其他模式生物而言，酵母菌具有

繁殖快、遺傳物質(zhì)相對較少

繁殖快、遺傳物質(zhì)相對較少

等特點，能更快獲得工程目標(biāo)。
（2）圖1為重組質(zhì)粒構(gòu)建的過程，其中AvrⅡ的酶切序列與位點是C↓CTAGG；SnaBⅠ的酶切序列與位點是TAC↓GTA；SacⅠ的酶切序列與位點是GAGCT↓C；BglⅡ的酶切序列與位點是 A↓GATCT。在對HPV的DNA進行PCR擴增時，需要設(shè)計兩種引物以保證目的基因和質(zhì)粒有相同的限制酶識別序列，根據(jù)選擇的質(zhì)粒及各限制酶識別序列，引物中需要有序列

-CCTAGG-和-TACGTA-

-CCTAGG-和-TACGTA-

。將得到的重組質(zhì)粒置于含有Ca²⁺的釀酒酵母培養(yǎng)液中，酵母菌吸收后，接種到

含有氨芐青霉素

含有氨芐青霉素

培養(yǎng)基上進行初步篩選，得到含有該質(zhì)粒的酵母菌，挑取菌落轉(zhuǎn)移到96孔板上培養(yǎng)，利用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

技術(shù)鑒定篩選確實表達了HPV的E6、E7蛋白質(zhì)的釀酒酵母，再進行擴大培養(yǎng)。

（3）在宮頸癌篩查中有HPV檢查，取病宮頸組織和局部黏液、分泌物進行HPV-DNA檢測。病毒DNA的檢測一般采取Real-time PCR技術(shù)即實時熒光測序（如圖2所示），需要的物質(zhì)有

耐高溫的DNA聚合酶

耐高溫的DNA聚合酶

、4種脫氧核苷酸、患者的組織或分泌物、水、緩沖液、兩種引物。探針序列含有HPV的特定序列，隨著PCR循環(huán)次數(shù)的增加，很快就檢測到了熒光，說明該患者

有

有

（有\(zhòng)沒有）HPV病毒。