螟蟲和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲是水稻生產(chǎn)上的主要害蟲，是導(dǎo)致水稻減產(chǎn)的主要原因之一。大量使用化學(xué)殺蟲劑，嚴(yán)重影響生態(tài)環(huán)境和生物多樣性，加大人體中毒幾率。轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻“華恢1號”由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)培育。種植這種轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻，可以基本解決鱗翅目害蟲問題，使水稻農(nóng)藥使用量減少30%-50%，產(chǎn)生明顯的經(jīng)濟和生態(tài)效益。
Ⅰ、圖1是獲取Bt毒蛋白基因的流程，結(jié)合所學(xué)知識及相關(guān)信息回答下列問題：

（1）圖中基因組文庫

大于

大于

cDNA文庫（填“大于”或者“小于”），B過程是

反轉(zhuǎn)錄酶

反轉(zhuǎn)錄酶

。
（2）為獲得大量的目的基因，可以用

PCR

PCR

技術(shù)進行擴增，該過程所用酶是

熱穩(wěn)定DNA聚合酶

熱穩(wěn)定DNA聚合酶

。還需根據(jù)目的基因兩端的部分堿基序列設(shè)計特異引物，若其中一種引物一共用了31個，則目的基因最多擴增了

5

5

次。
（3）殺蟲基因能在水稻體內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵是

插入（整合）到染色體上的DNA中

插入（整合）到染色體上的DNA中

，可以用DNA分子雜交技術(shù)進行檢驗。
Ⅱ、圖2表示“華恢1號”抗蟲水稻主要培育流程
（1）若受體細胞為水稻體細胞可采用

植物組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)

技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因植物體，該技術(shù)所依據(jù)的原理是

植物細胞的全能性

植物細胞的全能性

。
（2）殺蟲基因（crylA）是根據(jù)幾種Bt毒蛋白的分子結(jié)構(gòu)，設(shè)計并人工合成的，這屬于

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

工程技術(shù)范疇。
（3）組建理想的基因表達載體需要對天然的質(zhì)粒進行改造。圖3是天然土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（示部分基因及部分限制酶作用位點），據(jù)圖3分析：
①人工改造質(zhì)粒時，要使抗蟲基因能成功表達，還應(yīng)插入

啟動子

啟動子

。
②分別以含四環(huán)素和卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)轉(zhuǎn)化后的水稻胚細胞，觀察到的細胞生長的情況是在含卡那霉素的培養(yǎng)基中能夠生長，而在含四環(huán)素的培養(yǎng)基中不能生長。說明

重組DNA有卡那霉素的標(biāo)記基因，沒有抗四環(huán)素的標(biāo)記基因

重組DNA有卡那霉素的標(biāo)記基因，沒有抗四環(huán)素的標(biāo)記基因

。