腫瘤已成為嚴重危害人類健康的高發(fā)病，主要的治療手段有化療、放療和手術(shù)等，而腫瘤細胞對腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性是化療失敗的主要原因之一，研究表明腫瘤細胞耐藥性的產(chǎn)生與過量表達的跨膜轉(zhuǎn)運蛋白BCRP有關(guān)，研究人員嘗試建立穩(wěn)定表達BCRP的細胞系?；卮鹣铝袉栴}：
（1）研究人員從人的

癌細胞

癌細胞

（填“普通體細胞”或“癌細胞”）中提取出總RNA，逆轉(zhuǎn)錄后進行PCR擴增獲得大量BCRP基因。
（2）隨后構(gòu)建BCRP基因的真核表達載體，研究人員選擇了P質(zhì)粒作為載體，因為其具有：①能被真核細胞識別的啟動子，作用是

RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點

RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點

；②抗新霉素的標記基因；③多個限制酶切割位點，作用是

便于插入多種外源基因

便于插入多種外源基因

。
（3）在不破壞表達載體各功能序列的基礎(chǔ)_上，對上述環(huán)狀載體進行酶切得到線性化載體，隨后將其導入到受體細胞中，線性化載體可整合到染色體DNA上。聯(lián)系所學知識推測進行酶切得到線性化載體的原因是

與環(huán)狀載體相比，線性化載體能更穩(wěn)定地存在并發(fā)揮功能

與環(huán)狀載體相比，線性化載體能更穩(wěn)定地存在并發(fā)揮功能

。
（4）通過篩選獲得抗新霉素的受體細胞，并對其進行多層次檢測，最終獲得能高效表達BCRP的細胞，在培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間后分瓶進行

傳代

傳代

（填“原代”或“傳代”）培養(yǎng)，最終獲得穩(wěn)定細胞系，推測此細胞系在后續(xù)研究中的用途有

研究能阻止BCRP過量表達的藥物

研究能阻止BCRP過量表達的藥物

（寫出1點）。