神經生長因子（NGF）對神經細胞的增殖和分化有重要作用，對非神經性細胞的生長和活性有輔助作用，對神經性和非神經性疾病都有良好的潛在治療作用?？蒲腥藛T通過轉基因方法制備能在腮腺中特異性表達人源神經生長因子（hNGF）的轉基因豬，并采集該轉基因豬分泌的唾液，分離純化hNGF用于人類神經性疾病的治療?；卮鹣铝袉栴}：
（1）步驟一：將hNGF基因序列替換位于載體XhoⅠ和NotⅠ酶切位點之間的序列，構建含人源NGF的基因表達載體。該步驟中選擇XhoⅠ和NotⅠ兩種限制酶的優(yōu)點是 避免切制后目的基因和質粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接避免切制后目的基因和質粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接，在hNGF基因的兩端也必須含有XhoⅠ和NotⅠ酶識別的序列，添加的方法是 在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中。
（2）步驟二：將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞。該步驟使用的方法是 顯微注射法顯微注射法，目的是 使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達：
（3）步驟三：重構胚的構建。篩選成功導入重組質粒的豬胎兒成纖維細胞，進行細胞培養(yǎng)，該過程中會出現 細胞貼壁和接觸抑制細胞貼壁和接觸抑制的現象，需要用胰蛋白酶進行處理并及時分瓶培養(yǎng)。獲得的細胞作為核供體注入 去核的豬卵母細胞去核的豬卵母細胞中。
（4）步驟四：轉基因克隆豬的獲得。重構胚發(fā)育到 桑葚胚或囊胚桑葚胚或囊胚后經胚胎移植導入代孕豬子宮內，獲得的轉基因豬的遺傳物質來自 豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因。與乳腺生物反應器比較，該技術的優(yōu)點是 在胚胎移植時不需要對胚胎的性別進行選擇，豬產生唾液的時間早且時間長在胚胎移植時不需要對胚胎的性別進行選擇，豬產生唾液的時間早且時間長（寫出兩點）。
【答案】避免切制后目的基因和質粒發(fā)生自身環(huán)化，且能保證正確連接；在對hNGF基因進行PCR擴增時，將兩種限制酶的識別序列合成在兩種引物中；顯微注射法；使hNGF基因進入受體細胞，并在受體細胞中維持穩(wěn)定和表達；細胞貼壁和接觸抑制；去核的豬卵母細胞；桑葚胚或囊胚；豬成纖維細胞的細胞核、去核卵母細胞的細胞質和人的hNGF基因；在胚胎移植時不需要對胚胎的性別進行選擇，豬產生唾液的時間早且時間長
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/5/18 8:0:8組卷：12引用：3難度：0.7
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6