抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療。凝乳酶是奶酪生產中的關鍵性酶。下列是生產這兩種酶的相關思路，請回答下列問題：
（1）圖1為通過培育轉基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①圖中過程a指的是利用顯微注射顯微注射法將抗凝血酶Ⅲ蛋白基因導入受精卵。受體細胞不選用體細胞的理由是動物體細胞的全能型一般不能表現(xiàn)出來動物體細胞的全能型一般不能表現(xiàn)出來。
②b為早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，在胚胎移植前，需進行性別鑒定性別鑒定，目的是確定要培育的個體能產牛奶。
③可采用抗原-抗體雜交法來鑒定轉基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。該方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的單克隆抗體，請寫出制備該抗體的實驗思路向小鼠體內注射現(xiàn)成的（標準的/純化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，經多次篩選獲得能產生特異性抗體的雜交瘤細胞；對雜交瘤細胞擴增培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體向小鼠體內注射現(xiàn)成的（標準的/純化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，經多次篩選獲得能產生特異性抗體的雜交瘤細胞；對雜交瘤細胞擴增培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體。
（2）從牛胃液中分離得到的凝乳酶以其催化能力強而被廣泛應用，研究人員運用基因工程技術，將編碼該酶的基因轉移到了微生物細胞中。
①從牛胃細胞中提取mRNA，再通過逆轉錄逆轉錄形成cDNA．以此cDNA為模板通過PCR擴增目的基因，有時需要在引物的5'端設計限制酶限制酶（填“限制酶”/“DNA連接酶”/“RNA聚合酶”）的識別序列，以便構建重組DNA分子。
②為提高重組DNA分子的比例，在構建重組DNA分子（如圖2所示）時最好選用BamHⅠ和PstⅠBamHⅠ和PstⅠ作限制酶。
③經研究發(fā)現(xiàn)，如果將該凝乳酶的第20位和24位氨基酸變?yōu)榘腚装彼?，則其催化能力將提高2倍?，F(xiàn)已知通過蛋白質工程可生產高效凝乳酶，應直接改造的是凝乳酶基因凝乳酶基因（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】顯微注射；動物體細胞的全能型一般不能表現(xiàn)出來；性別鑒定；向小鼠體內注射現(xiàn)成的（標準的/純化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，經多次篩選獲得能產生特異性抗體的雜交瘤細胞；對雜交瘤細胞擴增培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體；逆轉錄；限制酶；BamHⅠ和PstⅠ；凝乳酶基因
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：13引用：1難度：0.6
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
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