為生產(chǎn)具有特定性能的α淀粉酶，研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了α淀粉酶基因（1656個堿基對），利用基因工程大量制備α淀粉酶，實驗流程見圖。請回答下列問題：
（1）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α淀粉酶基因前，需先獲得細(xì)菌的基因組DNA基因組DNA。
（2）為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接，需在引物的5′5′端加上限制性酶切位點，且常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制性酶切位點，主要目的是使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連。
（3）進(jìn)行擴(kuò)增時，反應(yīng)的溫度和時間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定，下列選項中②②的設(shè)定與引物有關(guān)，⑥⑥的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長度有關(guān)。（填序號）
①變性溫度
②退火溫度
③延伸溫度
④變性時間
⑤退火時間
⑥延伸時間
【考點】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】基因組DNA；5′；使DNA片段能定向插入表達(dá)載體，減少自連；②；⑥
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/7/9 8:0:8組卷：13引用：3難度：0.7
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1．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：41引用：3難度：0.6 -
2．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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