當(dāng)前位置： 2021-2022學(xué)年山東省青島二中高二（上）期末生物試卷> 試題詳情

如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源。該酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。已知當(dāng)甲醇作為唯一碳源時(shí)，該酵母菌中AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)（5'AOX1和3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子）。請(qǐng)分析回答：

（1）為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，應(yīng)該選擇
SnaBI　AvrⅡ
SnaBI　AvrⅡ
切割質(zhì)粒，并在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置接上
相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列
相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列
，這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是
確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）
確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）
。
（2）酶切獲取HBsAg基因后，需用
DNA連接酶
DNA連接酶
將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，并將其導(dǎo)入大腸桿菌以獲取
大量重組質(zhì)粒
大量重組質(zhì)粒
。
（3）步驟3中應(yīng)選用限制酶
BglⅡ
BglⅡ
來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，然后再將其導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌細(xì)胞。
（4）為了確認(rèn)巴斯德畢赤酵母菌轉(zhuǎn)化是否成功，在培養(yǎng)基中應(yīng)該加入
卡拉霉素
卡拉霉素
以便篩選：若要檢測(cè)轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞中是否含有HBsAg基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，可以用
分子雜交
分子雜交
方法進(jìn)行檢測(cè)。
（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入
甲醇
甲醇
以維持其生活，同時(shí)誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．

【答案】SnaBI　AvrⅡ；相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列；確保定向連接（避免質(zhì)粒和目的基因自身環(huán)化及自連）；DNA連接酶；大量重組質(zhì)粒；BglⅡ；卡拉霉素；分子雜交；甲醇

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：23引用：4難度：0.5

相似題

1．目前，科學(xué)家已在牛和山羊等動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物．下列與之相關(guān)的說法，正確的是（　　）

A．可以將目的基因直接導(dǎo)入受體細(xì)胞

B．實(shí)驗(yàn)過程中采用顯微注射的方法導(dǎo)入目的基因

C．檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄的方法是抗原-抗體雜交

D．目的基因只存在于動(dòng)物的乳腺細(xì)胞中

發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：5引用：1難度：0.9

解析

2．最近，科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并將其分泌到尿液中．這是繼哺乳動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后，在膀胱生物反應(yīng)器研究上另一進(jìn)展．
（1）將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫荏w細(xì)胞，常用的方法是

．所使用到儀器是

．
（2）在基因工程中，將目的基因與運(yùn)載體結(jié)合時(shí)，必須用

酶和

酶．常用的運(yùn)載體有

、

、

等，而作為運(yùn)載體必須具備相應(yīng)的條件，例如應(yīng)具有

以便進(jìn)行篩選．進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移時(shí)，通常要將外源基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物的

中，原因是

．
（3）通常采用

技術(shù)檢測(cè)外源基因是否插入了小鼠的基因組中．
（4）在研究膀胱生物反應(yīng)器時(shí)，應(yīng)使外源基因在小鼠的

細(xì)胞中特異性表達(dá)．
（5）如果將藥物蛋白基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物如牛、羊的膀胱上皮細(xì)胞中，從轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液中提取藥物比從乳汁中提取藥物的更大優(yōu)越性在于

．
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：3引用：1難度：0.3
解析
3．抗凝血酶是一種天然抗凝血?jiǎng)?，在臨床上被廣泛應(yīng)用。目前科學(xué)家已在豬和羊等動(dòng)物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了人的抗凝血酶，如圖是構(gòu)建抗凝血酶基因表達(dá)載體所用的pBR質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)及人抗凝血酶基因所在的DNA片段，回答下列問題：

（1）現(xiàn)有以下4種引物，引物A15'-GGACCCCGGG-3'；引物B：5'-CATTTCTAGA-3'；引物C：5'-CCTGGGGCCC-3'；引物D：5'-GTAAAGATCT-3'；，利用PCR擴(kuò)增獲取抗凝血酶基因，應(yīng)選用引物

（填引物名稱），擴(kuò)增產(chǎn)物可選擇限制酶

切割后再利用E?coliDNA連接酶連接到pBR質(zhì)粒上。
（2）所選用的pBR質(zhì)粒上含有啟動(dòng)子，其作用是

，將構(gòu)建的基因表達(dá)載體先導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞，然后將大腸桿菌涂布到含新霉素的選擇培養(yǎng)基上，長(zhǎng)出了多個(gè)大腸桿菌菌落，這些菌落并非都是目的菌株，原因是

。
（3）將篩選得到的目的菌株提取質(zhì)粒，再通過

方法導(dǎo)入到豬或羊的

細(xì)胞內(nèi)，通過培養(yǎng)即可獲得能表達(dá)人抗凝血酶的乳腺生物反應(yīng)器。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：4引用：1難度：0.6
解析

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1．目前，科學(xué)家已在牛和山羊等動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物．下列與之相關(guān)的說法，正確的是（ ）

1．目前，科學(xué)家已在牛和山羊等動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白等多種蛋白類藥物．下列與之相關(guān)的說法，正確的是（　　）