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19世紀(jì)末,巴斯德開創(chuàng)了第一次疫苗革命,其特點(diǎn)是接種滅活或減毒的病原微生物。20世紀(jì)70年代開始,現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展開創(chuàng)了第二次疫苗革命,使疫苗的研制進(jìn)入分子水平。圖1是通過基因工程制備乙型肝炎表面抗原(HbsAg)從而獲得乙肝疫苗的過程。
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在圖1步驟①和③中,需要用合適的限制酶切割乙肝表面抗原基因和質(zhì)?!,F(xiàn)將乙肝表面抗原基因及質(zhì)粒的部分限制酶的識(shí)別序列及位置表示為圖2。質(zhì)粒中的啟動(dòng)子是質(zhì)粒中基因得以正常表達(dá)所必需的部分。LacZ基因合成某種酶,該酶能將無色染料X-gal變成藍(lán)色,最終能在含無色染料X-gal的培養(yǎng)基上將含該基因的菌落染成藍(lán)色。
限制酶 EcoRⅠ BclⅠ BamHⅠ HindⅢ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn) 5'-GAATTC-3' 5'-TGATCA-3' 5'-GGATCC-3' 5'-AAGCTT-3'
(1)制備基因疫苗的基因可以從基因文庫中獲取,與基因組文庫中的基因相比,cDNA文庫中的基因在結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)是
無內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列
無內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列
,構(gòu)建cDNA文庫第一步需要
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶。
(2)為了避免自身環(huán)化及便于篩選,切割質(zhì)粒選用的限制酶是
BamHⅠ和HindⅢ
BamHⅠ和HindⅢ
,切割乙肝表面抗原基因選用的限制酶是
BclⅠ和HindⅢ
BclⅠ和HindⅢ

(3)為篩選含有乙肝表面抗原的大腸桿菌細(xì)胞,需要將導(dǎo)入操作之后的大腸桿菌接種到含
氨芐青霉素和無色染料X-gal
氨芐青霉素和無色染料X-gal
的固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上,挑選
白色/未被染成藍(lán)色
白色/未被染成藍(lán)色
的菌落純化培養(yǎng)。
(4)在圖1步驟④中,使用的基因工程工具酶是
DNA連接酶
DNA連接酶
。在一個(gè)乙肝表面抗原基因與一個(gè)質(zhì)粒重組的過程中(圖1步驟④),游離的磷酸基團(tuán)數(shù)目減少
4
4
個(gè)。
(5)若運(yùn)用PCR技術(shù)檢測(cè)乙肝表面抗原基因是否導(dǎo)入,需根據(jù)目的基因的序列設(shè)計(jì)
PCR引物
PCR引物
,利用待檢DNA為模板進(jìn)行PCR。PCR過程包括多次循環(huán),每個(gè)循環(huán)分為3個(gè)步驟:①
變性
變性
退火/復(fù)性
退火/復(fù)性
③延伸。
(6)下列有關(guān)限制酶的敘述,錯(cuò)誤的是
B
B

A.限制酶催化的反應(yīng)類型是水解反應(yīng)
B.限制酶破壞的是氫鍵
C.一種限制酶只能識(shí)別雙鏈DNA中某種特定的脫氧核苷酸序列
D.EcoRⅠ與HindⅢ相比較,EcoRⅠ酶切后的DNA片段較容易分離
(7)基因工程的誕生,帶動(dòng)了現(xiàn)代生物技術(shù)的迅猛發(fā)展,下列關(guān)于基因工程的敘述,正確的是
B
B

A.以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依據(jù)合成的目的基因與原基因的堿基序列相同
B.基因工程可以定向改造生物的性狀
C.基因工程經(jīng)常以抗生素的抗性基因?yàn)槟康幕?br />D.限制性核酸內(nèi)切酶一般能識(shí)別多種核苷酸序列

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】無內(nèi)含子、啟動(dòng)子、終止子等序列;逆轉(zhuǎn)錄;BamHⅠ和HindⅢ;BclⅠ和HindⅢ;氨芐青霉素和無色染料X-gal;白色/未被染成藍(lán)色;DNA連接酶;4;PCR引物;變性;退火/復(fù)性;B;B
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:8引用:1難度:0.6
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    發(fā)布:2024/12/20 5:0:2組卷:35引用:5難度:0.6
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項(xiàng))等。
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    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
    (填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”)對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
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    (填序號(hào))。過程②③采用的方法是
     
    。
    (4)⑤過程需要用到
     
    等植物激素,在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中,這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化,原因是
     
    。

    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
  • 3.如表為5種限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn),如圖為某種質(zhì)粒和目的基因,箭頭所指為限制酶酶切位點(diǎn)。現(xiàn)要將圖中的目的基因定向插入到質(zhì)粒中,以制備轉(zhuǎn)基因植株。下列說法正確的是( ?。?
    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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