血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位,其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。IgGFc基因片段(長(zhǎng)度為717bp)編碼人IgG抗體中的一段小肽,常作為融合蛋白標(biāo)簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo),本研究中用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽,科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體,并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌,請(qǐng)回答:
(1)流感病毒囊膜主要由 蛋白質(zhì)和磷脂蛋白質(zhì)和磷脂組成,囊膜上血凝素的合成場(chǎng)所在 宿主細(xì)胞的核糖體宿主細(xì)胞的核糖體。
(2)本實(shí)驗(yàn)用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽有利于 融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合,PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物 bb。
(3)設(shè)計(jì)引物時(shí),不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列,原因是 若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)。引物序列的長(zhǎng)度及 CG含量CG含量直接影響著PCR過(guò)程中退火溫度的設(shè)定。
(4)應(yīng)選擇限制酶 EcoRVEcoRV來(lái)切割質(zhì)粒A,然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合,同時(shí)加入 DNA連接DNA連接酶,使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接,用BamHⅠ和SacⅠ同時(shí)切割重組質(zhì)粒,完全酶切后的產(chǎn)物的長(zhǎng)度約為 717717bp。
(5)融合蛋白中的標(biāo)簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化,基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時(shí),選擇人IgGFc作為標(biāo)簽的優(yōu)點(diǎn)還有 人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合;DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】蛋白質(zhì)和磷脂;宿主細(xì)胞的核糖體;融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合;b;若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá);CG含量;EcoRV;DNA連接;717;人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:53引用:6難度:0.9
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