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血凝素基因(HA)編碼的血凝素是構(gòu)成流感病毒囊膜纖突的主要成分。成熟的血凝素包含HA1和HA2兩個(gè)亞單位,其中HA1含有病毒與受體相互作用的位點(diǎn)。IgGFc基因片段(長(zhǎng)度為717bp)編碼人IgG抗體中的一段小肽,常作為融合蛋白標(biāo)簽。蛋白質(zhì)分泌依賴于信號(hào)肽的引導(dǎo),本研究中用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽,科研人員嘗試構(gòu)建IL-2SS/HA1/IgGFc融合蛋白表達(dá)載體,并導(dǎo)入大腸桿菌表達(dá)和分泌,請(qǐng)回答:
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(1)流感病毒囊膜主要由
蛋白質(zhì)和磷脂
蛋白質(zhì)和磷脂
組成,囊膜上血凝素的合成場(chǎng)所在
宿主細(xì)胞的核糖體
宿主細(xì)胞的核糖體

(2)本實(shí)驗(yàn)用信號(hào)肽IL-2SS代替HA自身信號(hào)肽有利于
融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合
融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合
,PCR擴(kuò)增目的基因時(shí)應(yīng)該選擇圖中引物
b
b
。
(3)設(shè)計(jì)引物時(shí),不能包含基因HA1的終止密碼子的編碼序列,原因是
若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)
若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá)
。引物序列的長(zhǎng)度及
CG含量
CG含量
直接影響著PCR過(guò)程中退火溫度的設(shè)定。
(4)應(yīng)選擇限制酶
EcoRV
EcoRV
來(lái)切割質(zhì)粒A,然后直接將PCR產(chǎn)物與質(zhì)粒A混合,同時(shí)加入
DNA連接
DNA連接
酶,使得目的基因與質(zhì)粒A相連。若目的基因與質(zhì)粒A正向連接,用BamHⅠ和SacⅠ同時(shí)切割重組質(zhì)粒,完全酶切后的產(chǎn)物的長(zhǎng)度約為
717
717
bp。
(5)融合蛋白中的標(biāo)簽蛋白有利于目的蛋白的分離和純化,基因工程生產(chǎn)HA1作為疫苗時(shí),選擇人IgGFc作為標(biāo)簽的優(yōu)點(diǎn)還有
人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
。

【答案】蛋白質(zhì)和磷脂;宿主細(xì)胞的核糖體;融合蛋白表達(dá)并避免自身產(chǎn)生的融合蛋白與自身受體結(jié)合;b;若設(shè)計(jì)引物是含有HA1的終止密碼子,則核糖體讀到終止密碼子時(shí)就停止翻譯,導(dǎo)致IgGFc基因不能正常表達(dá);CG含量;EcoRV;DNA連接;717;人體自身即可產(chǎn)生IgG抗體,避免了制作單克隆抗體的復(fù)雜過(guò)程
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:53引用:6難度:0.9
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  • 1.下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.7
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    發(fā)布:2024/12/31 5:0:5組卷:3引用:2難度:0.7
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    (1)基因工程中所用的目的基因可以人工合成,也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括
     
     
    。
    (2)生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí),解開(kāi)DNA雙鏈的酶是
     
    。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí),使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是
     
    。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的
     

    (3)DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶,常見(jiàn)的有
     
     
    ,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是
     
    。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí),DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是
     
    。
    (4)提取RNA時(shí),提取液中需添加RNA酶抑制劑,其目的是
     
    。
    (5)若獲得的轉(zhuǎn)基因植株(幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中)抗真菌病的能力沒(méi)有提高,根據(jù)中心法則分析,其可能的原因是
     

    發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:2引用:2難度:0.6
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