啟動子可分為組成型啟動子和誘導(dǎo)型啟動子。35S啟動子是組成型啟動子，能夠持續(xù)、高效地啟動目的基因在植物各種組織中的表達，但往往也會阻礙植物的生長發(fā)育；Rd29A啟動子是一種逆境誘導(dǎo)型啟動子。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強的抗旱作用。科研人員構(gòu)建Rd29A啟動子驅(qū)動AmDHN基因表達的載體，過程如圖1。再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化“敖漢苜?！蹦秃敌缕贩N，以期在干旱地區(qū)發(fā)展苜蓿產(chǎn)業(yè)。
| 限制酶 | BclⅠ | SacⅠ | BamHⅠ | PstⅠ | SmaⅠ |
| 識別序列和切割位點 | T↓GATCA | GAGCT↓C | G↓GATCC | CTGCA↓G | CCC↓GGG |
?（1）科研人員擴增Rd29A啟動子所設(shè)計的引物如下，根據(jù)引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構(gòu)建載體2時選用的限制酶是
SmaI和SacI
SmaI和SacI
。為了提高構(gòu)建載體3的成功率，選用 BclI和SacI
BclI和SacI
酶切割載體1、2。上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3'
下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3'
（2）載體5需先轉(zhuǎn)入
農(nóng)桿菌
農(nóng)桿菌
后再轉(zhuǎn)化苜蓿，轉(zhuǎn)化后應(yīng)在培養(yǎng)基中添加 新霉素
新霉素
，以篩選轉(zhuǎn)化成功的愈傷組織。（3）為檢測轉(zhuǎn)基因苜蓿中AmDHN基因的轉(zhuǎn)錄水平，挑選10株轉(zhuǎn)基因植株，利用自來水和20%PEG（模擬干旱條件）處理8h,提取RNA通過RT-PCR檢測AmDHN基因和MtActin基因（一種骨架蛋白基因）的表達水平，其結(jié)果如圖2：
①選擇MtActin基因轉(zhuǎn)錄水平作為參照的依據(jù)是MtActin基因在各細胞中表達
相對恒定
相對恒定
。12345123AmDHN②自來水處理和20%PEG條件下的AmDHN基因表達水平的差異說明：
干旱能誘導(dǎo)Rd29A啟動子啟動轉(zhuǎn)錄
干旱能誘導(dǎo)Rd29A啟動子啟動轉(zhuǎn)錄
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】SmaI和SacI；BclI和SacI；農(nóng)桿菌；新霉素；相對恒定；干旱能誘導(dǎo)Rd29A啟動子啟動轉(zhuǎn)錄
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/13 8:0:9組卷：5引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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