研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉染大麗輪枝菌，培育表達綠色熒光蛋白的轉基因菌株。主要過程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應基因轉錄的模板鏈）。
（1）第①步：PCR擴增sGFP基因。PCR擴增sGFP的原理是 DNA雙鏈復制DNA雙鏈復制；圖中b鏈的堿基序列黏性末端（5′→3′）為 AGCTAGCT。
（2）第②步：目的基因與運載體結合。②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶，此時目的基因插入到 構巢曲霉構巢曲霉啟動子之后，目的是 保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達。
（3）第③步：目的基因導入大麗輪枝菌。該過程需要先將目的基因導入農桿菌，而后將轉化后的農桿菌放置于含有 潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基上，篩選出含有目的基因的農桿菌。將導入重組質粒的農桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細胞懸液中，在適宜條件下完成轉染后利用濾膜過濾得到孢子細胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 熒光強度熒光強度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA雙鏈復制；AGCT；DNA連接酶；構巢曲霉；保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細胞中表達；潮霉素；熒光強度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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