pUC質(zhì)粒載體如圖所示，目的基因插入到Amp′或LacZ′中均會導致相應基因失活。篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌可采用藍白斑法，機制如下：LacZ′基因在IPTG誘導下表達的α-肽可與大腸桿菌自身編碼的β-肽互補從而產(chǎn)生有活性的β-半乳糖苷酶，該酶能夠水解X-gal使菌落呈藍色，否則呈白色。某科研人員利用LacZ′基因與目的基因構(gòu)建基因表達載體A后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：
說明：1.Amp′表示氨芐青霉素抗性基因
LacZ′基因表示β-半乳糖苷酶基因部分DNA序列；
2.SmaI與MstI識別序列和切割位點不同
（1）1967年科學家發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒能自我復制，并可以在細菌細胞間轉(zhuǎn)移，這一發(fā)現(xiàn)為基因轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)移找到了一種運載工具。
（2）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用調(diào)控作用的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技術，該技術一般由變性→復性（退火）→延伸變性→復性（退火）→延伸三個基本反應步驟構(gòu)成。
（3）作為基因表達載體除了需要有復制原點、標記基因、目的基因外，還需要具有啟動子和終止子啟動子和終止子。為了避免目的基因的自身環(huán)化，寫出構(gòu)建基因表達載體A的主要實驗步驟：用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應。
（4）轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需放在含有氨芐青霉素、IPTG和X-galIPTG和X-gal的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，篩選出白色的菌落即為含有重組質(zhì)粒（基因表達載體A）重組質(zhì)粒（基因表達載體A）的大腸桿菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因轉(zhuǎn)移；調(diào)控作用；變性→復性（退火）→延伸；啟動子和終止子；用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應；IPTG和X-gal；重組質(zhì)粒（基因表達載體A）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應用的生物技術有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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