新冠病毒核酸檢測(cè)的原理為實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)檢測(cè)法,技術(shù)流程如圖所示,在PCR擴(kuò)增時(shí)加入能與目的基因(新冠病毒的N基因)結(jié)合的熒光探針,①②③表示相關(guān)步驟?;卮鹣铝袉栴}:
(1)qPCR過程中,需先以RNA為模板合成cDNA,故裝置中需添加酶
逆轉(zhuǎn)錄酶
逆轉(zhuǎn)錄酶
。為確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性,在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的 特異性核苷酸序列
特異性核苷酸序列
來進(jìn)行。PCR過程每次循環(huán)分為3步,其中溫度最低的一步是 復(fù)性
復(fù)性
。
(2)根據(jù)熒光探針功能分析,熒光探針中堿基序列的設(shè)計(jì)應(yīng)主要依據(jù)。在配制PCR擴(kuò)增液時(shí),加入的熒光探針序列為5'-TTGCT……AGATT-3',如果模板中存在N基因序列,與探針結(jié)合的序列應(yīng)該是5'-新冠病毒的N基因的堿基序列—AATCT……AGCAA—
新冠病毒的N基因的堿基序列—AATCT……AGCAA—
-3'。如果某人沒有感染新冠病毒,則進(jìn)行PCR時(shí)DNA實(shí)時(shí)熒光信號(hào)強(qiáng)度 不變
不變
(填“增強(qiáng)”“減弱”或“不變”)。
(3)還可對(duì)新冠病毒進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè),向小鼠體內(nèi)注射新冠病毒S蛋白(決定病毒入侵易感細(xì)胞的關(guān)鍵蛋白)后分離產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞,并與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合,常用的融合方法有 PEG融合/滅活病毒誘導(dǎo)融合法
PEG融合/滅活病毒誘導(dǎo)融合法
(答出1種);再經(jīng)多次篩選、檢測(cè),獲得雜交瘤細(xì)胞,該種細(xì)胞的特點(diǎn)是 既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生與S蛋白特異性結(jié)合的專一抗體
既能迅速大量增殖,又能產(chǎn)生與S蛋白特異性結(jié)合的專一抗體
。在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng),獲得大量可與S蛋白特異性結(jié)合的單克隆抗體作為診斷試劑。