干燥綜合征(SS)是一種自身免疫病,其血清中存在多種抗體,其中以SSB抗體特異性最強(qiáng)??蒲腥藛T為生產(chǎn)SSB抗體的檢測(cè)試劑,利用基因工程獲得重組SSB蛋白,流程如下,請(qǐng)回答:
(1)利用RNA通過(guò)①過(guò)程獲得cDNA需要 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄酶。通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增SSB基因的前提是要有 一段已知的SSB基因的核苷酸序列一段已知的SSB基因的核苷酸序列,以便合成引物。為與PET41a質(zhì)粒連接,獲得的目的基因A兩端要含有 BamHⅠ
和XhoⅠBamHⅠ
和XhoⅠ,酶切位點(diǎn)。
(2)獲得含SSB基因的重組質(zhì)粒后,進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)切割原質(zhì)粒和重組質(zhì)粒,獲得片段大小如表(1kb=1000堿基對(duì)),分析數(shù)據(jù),計(jì)算可得SSB基因的長(zhǎng)度為 3kb3kb。與人基因組文庫(kù)中的SSB基因相比,通過(guò)①過(guò)程獲得的SSB基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是 沒(méi)有啟動(dòng)子和內(nèi)含子沒(méi)有啟動(dòng)子和內(nèi)含子。
和XhoⅠ
和XhoⅠ
限制酶 | EcoRI | BamHI和XhoI |
原質(zhì)粒 | 8.1kb | 2.7kb、5.4kb |
重組質(zhì)粒 | 3.4kb、5.0kb | 未做該處理 |
感受態(tài)
感受態(tài)
的大腸桿菌內(nèi),并接種于添加 卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上,收集菌落進(jìn)行鑒定,將陽(yáng)性菌落進(jìn)一步純化后將菌體破碎處理,篩選得到重組SSB蛋白。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄;一段已知的SSB基因的核苷酸序列;BamHⅠ
和XhoⅠ;3kb;沒(méi)有啟動(dòng)子和內(nèi)含子;感受態(tài);卡那霉素
和XhoⅠ;3kb;沒(méi)有啟動(dòng)子和內(nèi)含子;感受態(tài);卡那霉素
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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