一種天然蛋白t-PA能高效降解因血漿纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥，但是心梗患者注射大劑量的t-PA會誘發(fā)顱內(nèi)出血。研究證實，將t-PA蛋白第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低其誘發(fā)出血的副作用。據(jù)此，先對天然t-PA基因的堿基序列進行改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。如圖表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶識別序列和切割位點，pCLY11為質(zhì)粒，請回答下列問題：
（1）可以先提取細胞的 mRNAmRNA來合成總cDNA，再從cDNA文庫中獲取t-PA基因。通過改造t-PA基因制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程。
（2）若改造后的t-PA基因的黏性末端如上圖所示，則需要選用限制酶 XmaⅠ和BglⅡXmaⅠ和BglⅡ切割質(zhì)粒pCLY11，保證質(zhì)粒與t-PA改良基因高效連接。再用DNA連接酶催化形成 磷酸二酯磷酸二酯鍵，構(gòu)建重組質(zhì)粒。
（3）以大腸桿菌作為受體細胞，在含新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細胞并非都是目的菌株，原因是 導(dǎo)入未連目的基因的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長導(dǎo)入未連目的基因的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長。成功獲取能生產(chǎn)改良t-PA蛋白的工程菌株后，利用 液體液體（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基在發(fā)酵罐中進行大量生產(chǎn)。
（4）除了用工程菌株，還可以用下列方法從轉(zhuǎn)基因牛乳汁中獲得改良t-PA蛋白：
過程②常用的方法是 顯微注射法顯微注射法；在過程④前需要取囊胚的 滋養(yǎng)層滋養(yǎng)層細胞做DNA分析進行性別鑒定；為了保證t-PA改良基因能在乳腺細胞中表達，構(gòu)建基因表達載體需要將其與 乳腺蛋白基因的啟動子乳腺蛋白基因的啟動子等調(diào)控元件重組在一起。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】mRNA；蛋白質(zhì)；XmaⅠ和BglⅡ；磷酸二酯；導(dǎo)入未連目的基因的質(zhì)粒的大腸桿菌也可以在這種培養(yǎng)基上生長；液體；顯微注射法；滋養(yǎng)層；乳腺蛋白基因的啟動子
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：21引用：2難度：0.4
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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