神經(jīng)纖毛蛋白-1（NRP-1）能在腫瘤細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的新型受體，通過(guò)參與多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)來(lái)促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究人員從腫瘤細(xì)胞中擴(kuò)增出NRP-1基因并將其導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，分離提純相應(yīng)NRP-1，并將其免疫小鼠，為靶向治療乳腺癌（MCF7）提供抗NRP-1的單克隆抗體（NRP-1MAb）。
（1）利用PCR技術(shù)可以從腫瘤細(xì)胞的基因組中分離擴(kuò)增得到完整的NRP-1基因，其原因是使用
與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合
與NRP-1基因兩端特異性結(jié)合
的引物可以從模板DNA中擴(kuò)增出該基因。該技術(shù)可用于基因工程四個(gè)基本步驟中的獲取目的基因和目的基因的檢測(cè)與鑒定
獲取目的基因和目的基因的檢測(cè)與鑒定
步驟。
（2）NRP-1基因表達(dá)載體的構(gòu)建如圖1所示。表達(dá)載體上除了標(biāo)注的DNA片段外，在NRP-1基因上游還必須擁有的DNA片段（箭頭所示）是啟動(dòng)子
啟動(dòng)子
，其作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄
RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄
。
（3）研究人員將分離提純的NRP-1免疫小鼠后，取其脾臟中B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在該培養(yǎng)基上不能存活的是未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞
未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核的細(xì)胞
。選取檢測(cè)抗體陽(yáng)性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)時(shí)需要的氣體環(huán)境是95%的空氣和5%的CO2
95%的空氣和5%的CO2
。
（4）研究發(fā)現(xiàn)，NRP-1在MCF7細(xì)胞中高表達(dá)。將MCF7細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開(kāi)始給藥NRP-1MAb（低劑量lmg/kg；中劑量5mg/kg；高劑量10mg/kg），共給藥7次。每隔5天測(cè)算一次腫瘤的體積，如圖2所示。分析圖2可得出的結(jié)論是NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著
NRP-1MAb能有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的更顯著
。
（5）由題中信息推測(cè)NRP-1Mab抑制腫瘤的作用機(jī)理是：NRP-1Mab與NRP-1特異性結(jié)合，阻斷了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與NRP-1的結(jié)合
血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與NRP-1的結(jié)合
，抑制了腫瘤血管生成，進(jìn)而降低了腫瘤的體積。
