草甘膦是一種非選擇性除草劑，殺死雜草的同時(shí)也殺死農(nóng)作物。它與植物體內(nèi)的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）結(jié)構(gòu)相似，可與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶，阻止PEP轉(zhuǎn)化，影響植物細(xì)胞正常代謝。我國(guó)科學(xué)家從草甘膦施用土壤中的某微生物體內(nèi)獲取GR79基因（草甘膦抗性基因），并將其導(dǎo)入植物體細(xì)胞中獲得抗草甘膦的轉(zhuǎn)基因植物。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）GR79基因發(fā)揮抗草甘膦作用的機(jī)理可能是

GR79基因表達(dá)的產(chǎn)物阻止（抑制）草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶

GR79基因表達(dá)的產(chǎn)物阻止（抑制）草甘膦與PEP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合EPSP合酶

。從分離得到的某土壤微生物體內(nèi)獲取含有GR79基因的質(zhì)粒，并將其保存在某細(xì)菌群體（受體菌）中，各個(gè)受體菌分別含有該微生物的不同的基因，這些受體菌群中該微生物的所有DNA序列克隆的匯總，稱為

基因組文庫(kù)

基因組文庫(kù)

。
（2）據(jù)圖推測(cè)，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增GR79基因時(shí)，需設(shè)計(jì)能與該基因兩條模板鏈3′端

堿基互補(bǔ)配對(duì)

堿基互補(bǔ)配對(duì)

的引物；同時(shí)為構(gòu)建該基因表達(dá)載體，需在引物1和引物2的

5′端

5′端

端加上限制酶

PstⅠ和XhoⅠ

PstⅠ和XhoⅠ

的識(shí)別序列。
（3）實(shí)驗(yàn)中常采用

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化

法將GR79基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物受體細(xì)胞；為避免該基因在近緣農(nóng)作物中傳播，可將其導(dǎo)入植物受體細(xì)胞的

細(xì)胞質(zhì)DNA上（或葉綠體DNA或線粒體DNA或葉綠體和線粒體DNA上）

細(xì)胞質(zhì)DNA上（或葉綠體DNA或線粒體DNA或葉綠體和線粒體DNA上）

；除溫度、酸堿度等環(huán)境因素外，影響該基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞成功率的因素有

農(nóng)桿菌的種類和活性、受體細(xì)胞的基因型和活性等

農(nóng)桿菌的種類和活性、受體細(xì)胞的基因型和活性等

。
（4）為檢測(cè)GR79基因是否導(dǎo)入植物體細(xì)胞，可在培養(yǎng)基中添加

草甘膦

草甘膦

篩選含該基因的受體細(xì)胞；也可利用

核酸分子雜交

核酸分子雜交

技術(shù)更加精準(zhǔn)地進(jìn)行檢測(cè)，若待檢DNA中含有該基因，則會(huì)發(fā)現(xiàn)硝酸纖維素膜上會(huì)出現(xiàn)

放射性或熒光條帶

放射性或熒光條帶

。
（5）經(jīng)檢測(cè)，科研人員發(fā)現(xiàn)部分獲得GR79基因的植物幼苗不具有抗草甘膦的能力，原因可能是

草甘膦抗性基因轉(zhuǎn)錄或翻譯異常

草甘膦抗性基因轉(zhuǎn)錄或翻譯異常

。