新冠病毒是一種單鏈RNA病毒,常用“熒光RT-PCR技術(shù)”進行檢測,方法是取檢測者的mRNA在試劑盒中逆轉(zhuǎn)錄出cDNA,并大量擴增,同時利用盒中熒光標記的新冠病毒核酸探針來檢測PCR產(chǎn)物中是否含有新冠病毒的cDNA,在檢測過程中,隨著PCR的進行,反應產(chǎn)物不斷累積,“雜交雙鏈”熒光信號的強度也等比例增加,可通過熒光強度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖(如圖)。請回答下列問題:
(1)題中“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中應該含有 逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶酶、熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶)酶、檢測者mRNA、熒光標記的新冠病毒核酸探針熒光標記的新冠病毒核酸探針、引物,dNTP、緩沖體系。
(2)如果要同時擴增兩種基因,則試劑盒中的引物應該有 44種,引物的作用是 使熱穩(wěn)定DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使熱穩(wěn)定DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
(3)圖中“平臺期”出現(xiàn)的最可能的原因是 試劑盒中的原料(引物,探針)數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料(引物,探針)數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加。理論上,在檢測過程中,有熒光標記的“雜交雙鏈”出現(xiàn),則說明檢測結(jié)果呈 陽陽(填“陰”或“陽”)性,但為了保證檢測結(jié)果的準確性,一般要達到或超過閾值時才確診?,F(xiàn)有甲乙兩個待檢樣本,檢測時都出現(xiàn)了上述形態(tài)的曲線,但甲的a點比乙的a點明顯左移,請給這種結(jié)果做出科學合理的解釋(試劑盒合格且正常,操作過程規(guī)范且準確):甲樣本中的新冠病毒含量更高,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少甲樣本中的新冠病毒含量更高,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶;熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶);熒光標記的新冠病毒核酸探針;4;使熱穩(wěn)定DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸;試劑盒中的原料(引物,探針)數(shù)量一定,超出一定的循環(huán)數(shù)后,熒光標記的“雜交雙鏈”不再增加;陽;甲樣本中的新冠病毒含量更高,達到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:15引用:1難度:0.6
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